直接染色スミア標本の利点

スミア作製

直接染色の最初のステップはスミアの作製です。培養や検体から得た細胞をガラススライド上に薄く広げ、乾燥させた後、熱や化学固定剤で固定します。固定により細菌がスライドに付着し、染色時に洗い流されません。スミアは個々の細胞が観察できる程度に薄く、染色工程中の洗浄に耐えられるよう十分に固定する必要があります。

染色剤

微生物は水分が多くほぼ無色です。染色により色が付いて形態や構造が観察しやすくなります。染色剤はイオン性の塩で、溶解すると正イオン（カチオン）と負イオン（アニオン）に分かれます。色を持つのはカチオンかアニオンのどちらかで、これにより「塩基性染色剤」または「酸性染色剤」に分類されます。塩基性染色剤は色の付いたカチオンと無色のアニオンから成り、代表例はメチレンブルー、塩基性フチシン、結晶紫です。酸性染色剤は色の付いたアニオンと無色のカチオンからなり、エオシン、コンゴーレッド、ニグロシンなどがあります。

原理

細菌はわずかに負の電荷を帯びているため、正に帯電した塩基性染色剤を引き寄せて結合します。染料が細菌自体に付着するため、これを「直接染色」と呼びます。直接染色は単染色（1種の染料でサイズ、形態、配列を観察）と差別染色（例：グラム染色のように2種の塩基性染料を使い、形態に加えて細菌群を区別）に分けられます。一方、酸性染色剤を用いる負染色（間接染色）は細菌が染料をはじき、背景が染まった状態で細菌は無色に見えます。

利点

直接染色は細菌観察で最も広く用いられる手法です。費用が安く、手順が簡単で比較的迅速に結果が得られます。診断から治療までを同日で行えるため、細菌性髄膜炎など致死率の高い感染症の早期診断に有用です。染色したスミアは永久標本となり、後日再検査が可能です。また、直接染色は細菌を殺菌するため、取り扱い時の感染リスクが低減します。