プロテアーゼ基質製品にラベルを付ける方法

タンパク質は、体内のすべての細胞の成分です。プロテアーゼ（タンパク質分解酵素またはプロテイナーゼとも呼ばれる）は、タンパク質を分解する機能である消化酵素です。消化に加えて、プロテアーゼは、血液凝固、代謝制御、免疫調節にも不可欠です。生化学プロセス（触媒作用）中に、基質は酵素の活性部位に結合し、その後部位から放出される1つ以上の製品に変換されます。このプロセスは、目的の結果に応じて、体内の反応を増加または減少させるために増強または抑制することができます。基板製品の標識により、科学者はこの酵素活性を測定できます。蛍光標識は、特定の分子を着色するために使用される手法であり、追跡が容易になります。

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必要なもの

• ターゲット分子カクテル
• 蛍光色素標識キット
• 蛍光測定器

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手順

1. プロテアーゼ基質産物のラベルを付ける方法

   • 1

     蛍光染料を選択してください。一般的な染料には、ローダミンとフルオレセインが含まれます。 これらは通常、メーカーから購入できます。

   • 2

     反応を実行し、サイズの除外クロマトグラフィー（サイズに基づいて分子を分離するプロセス）を使用して、標的分子から未使用フルオロフォアを除去します。染料除去カラムも一般的に使用されています。これらは多くの場合、ラベルキットで宣伝されています。

   • 3

     分子を検出します。蛍光顕微鏡などの蛍光測定器を使用します。特定の波長の光が分子を通過し（いくつかの技術のために間接的に）、フルオロフォアを照らします。

   • 4

     測定を行います。アッセイは、消費される基質の量または一定期間にわたって放出される生成物の量のいずれかを測定するため、酵素量はモル（物理量）または酵素単位（活動）で測定できます。

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