共免疫沈降プロトコル

共免疫沈降プロトコル（CO-IP）は、タンパク質相互作用を分析するために広く使用されている手順です。手順は通常、3つのステップで構成されています。抗体は細胞溶解物に導入され、抗体株 - タンパク質複合体は化学的に結合され、タンパク質は分析を通じて同定されます。

1. 共免疫沈降の概要

   • Co-IPは、正確なテスト結果を確保するための一連のステップで構成されています。最初のステップでは、タンパク質に固有の抗体を追加する必要があります。 2番目のステップでは、タンパク質Gまたはタンパク質Aセファロースを使用して、抗体タンパク質複合体を結合します。最後に、精製されたタンパク質バンドまたはウエスタンブロット分析のシーケンスを使用して、同時沈降タンパク質を識別するために使用されます。

   一般的な手順

   • プロトコルは、プロセスのメカニズムの用語で3つの一般的なステップに分けることができます。最初のステップは、手順を最小限の時間で完了するためのワークフローです。 2番目のステップは、手順の一般的な考慮事項です。最後のステップはトラブルシューティングです。

   特定の手順

   • ワークフローは、吸収分析のために培養を準備することから始まり、タンパク質の存在を決定することで終わります。一般的な考慮事項は、事前洗浄、バッファーの選択、プロテインAまたはプロテインG樹脂の選択などの重要な手順で構成されています。トラブルシューティングは、タンパク質の検出なし、タンパク質への抗体の結合、抗体断片、および失敗したCO-IPの可能性などの問題を扱う。