ビオチン化プロトコルの概要と手順

ビオチン化は、ビタミンH（ビオチン）をタンパク質やその他の分子に結合させる手法です。主にバイオテクノロジーや分子生物学の研究で、DNA、タンパク質、抗原などの解析に利用されます。

抗体のビオチン化

抗体にビオチンを結合させる際は、pH9の炭酸水素ナトリウム緩衝液、ジメチルスルホキシド（DMSO）中のNHS‑ビオチン、そしてPBSを使用します。試料を炭酸水素ナトリウムで調整し、DMSO中のNHS‑ビオチンと混合します。その後、抗体溶液に加えて室温で4時間、または39.2°F（約4°C）で一晩インキュベートし、最後にPBSで希釈します。

細胞表面のビオチン化

細胞表面のビオチン化では、培養細胞をpH7.4のPBSと、スルホスカルミド基を有するビオチン化試薬（例：sulfosuccinimidyl‑2‑(biotinamido)ethyl‑1,3‑dithiopropionate）で処理します。ビオチン試薬と緩衝液を混合し、細胞に添加後遠心分離します。得られた細胞ペレットはゲル電気泳動で解析し、ビオチン化された表面タンパク質を検出します。

ペプチドのビオチン化

ペプチドのビオチン化には、NHS‑SSビオチンを使用します。商業用NHS‑SSビオチンを水に溶解し、ペプチド試料と炭酸水素ナトリウム緩衝液を加えてpHを調整します。混合液を氷上で2時間インキュベートし、ビオチンが結合したペプチドを得ます。必要に応じて、ビオチン有無の状態を確認できます。