ビオチン化プロトコル

ビオチン化は、ビオチン、またはビタミンHをタンパク質または他の分子にリンクするプロセスです。この科学的手順は、主にDNA、タンパク質、抗原を含むバイオテクノロジーおよび分子生物学の研究で使用されています。これは、体の免疫システムが侵略者として認識している分子です。ビオチン化プロトコルには、細胞表面のビオチン化だけでなく、抗体とペプチドのビオチン化が含まれます。

1. 抗体のビオチン化

   • ビオチンを抗体に結合するには、抗原が体に入るときにタンパク質を産生するために、技術者はpH 9で重炭酸ナトリウム（NAHC03）を使用します。ジメチルスルホキシド（DMSO）;

     NHS-ビオチンとPBSと呼ばれる生理食物物質。サンプルは重炭酸ナトリウムと混合され、後にDMSOのNHS-ビオチンに添加されます。次に、溶液を分析された抗体に加え、室温で4時間、華氏39.2度で一晩一晩回転子と呼ばれる機器にインキュベートします。最後に、溶液をPBSで希釈します。

   細胞表面ビオチン化

   • 細胞表面のビオチン化プロトコルでは、技術者は組織培養、PH 7.4のリン酸緩衝生理食塩水（PBS）、およびスルホスクシニミジル-2-（ビオチンアミド）エチル-1,3-ジチオプロピオン酸バッファー溶液を使用します。遠心分離。固体含有量と特定のタンパク質は、後にゲル電気泳動プレートで分析されます。

   ペプチドのビオチン化

   • ペプチドのビオチン化を行うために、「モノクローナル抗体：実用的なアプローチ」のフィリップシェパードによると、使用される試薬はNHS-SSビオチンです。ペプチドは、タンパク質とDNAを形成する分子であるアミノ酸の短い断片です。このプロトコルでは、市販のソリューションNHS-SSビオチンが水に溶解しています。次に、ペプチドサンプルを重炭酸ナトリウムとともに加えて、酸性度またはpHのバランスをとります。その後、溶液を氷上で2時間インキュベートします。技術者は、ビオチン分子の有無にかかわらずサンプルを観察できます。