細胞生存率を測定する方法

細胞培養を含むほとんどの生物学的実験では、重要なステップには、どの細胞が生きていて、どの細胞が死んでいるかを知ることが含まれます。色素除外は、細胞生存率を測定する最も一般的な方法です。色素の除外は、生きている細胞には無傷の膜が含まれており、死んだ細胞が含まれないという理論に基づいているため、死んだ細胞は色素を細胞質に吸収します。異なる染料とプロトコルがあり、選択した方法は、コスト、感度、容易さ、手順の長さに基づいている必要があります。トリパンブルーは、5〜10分で手順を実行できるため、細胞の生存率を測定するために使用される一般的な染料です。染料試薬の量のみがかかります。

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必要なもの

• 0.4％トリパンブルー試薬
• hemacitomer
• カバースリップ
• micropipette
• ピペットのヒント
• リン酸緩衝生理食塩水（PBS）
• 光顕微鏡

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手順

1. • 1

     測定している細胞のペレットを取得します。

   • 2

     PBSの細胞ペレットを再懸濁して、約5 x 105細胞/mLを取得します。 PBSが使用されます。これは、細胞が無血清環境にある場合、生存率測定がより正確であるためです。血清タンパク質も染色し、誤解を招く結果をもたらす可能性があります。

   • 3

     PBSの細胞懸濁液の等しい部分を0.4％トリパンブルー染料の等しい部分に加えて、1〜2希釈（例：100 ULの細胞から100 ULのトリパンブルー）を取得し、上下にピペットして混合します。

   • 4

     混合物を室温で3分未満でインキュベートします。約5分後に細胞がカウントされた場合、細胞死のために生存率が不正確になります。

   • 5

     カバースリップが既に所定の位置にある状態で、溶血計カウンターの両側を細胞懸濁液で満たします。通常、各側は10〜20 ul。

     です
   • 6

     光学顕微鏡の段階にhemacitomerを置き、細胞に焦点を合わせます。

   • 7

     半眼窩計の両側には、複数の正方形が含まれています。 hemacitomerの1つの正方形の細胞の総数をカウントします。次に、同じ正方形で、生存不能（青）および生存可能な（クリア）細胞の数を個別に数えます。

   • 8

     生存細胞の数に総細胞の数を割って100を掛けることにより、正方形の生存細胞の割合を計算します。これを血液計の複数の正方形に対してこれを行い、平均生存率測定を取得します。