競合バインディングアッセイプロトコル

競合結合アッセイは、受容体と呼ばれる細胞表面に見られる特殊なタンパク質のタンパク質または化学物質の結合能力を決定する実験です。この方法は医学研究でよく使用されますが、どの薬物が受容体に結合するかを判断し、受容体活性を修正することもできます。これにより、細胞の挙動が変化する可能性があります。

1. 細胞調製

   • 細胞を再懸濁して、氷冷リン酸緩衝生理食塩水（PBS）に懸濁します。特殊な市販のタンパク質アッセイを使用して、タンパク質濃度を測定して、等しいタンパク質レベルを確認します。

   アッセイ

   • 受容体であるリガンドに結合することが知られている放射能標識タンパク質を細胞または組織懸濁液に加えます。試験薬またはタンパク質である競合他社を追加し、放射性リガンドおよび細胞懸濁液とincub延します。さまざまな濃度の試験薬を研究する必要があります。インキュベーションに続いて、結合していないリガンドを分離し、放射能を測定します。

   データ分析

   • 決定される通常の尺度は、IC50として知られている受容体を阻害する最大濃度の半分です。これは、グラフのx軸上の対数スケールで濃度をプロットすることによって計算されますが、y軸は阻害の割合を表します。 S字型であるシグモイド曲線を生成する必要があります。 IC50は50％の阻害点であり、対応する濃度はグラフから読むことができます。