プラークアッセイ方法

アッセイは、ウイルスを隔離および精製し、ウイルス力価（感染をもたらすウイルスの最低濃度）を決定するために使用される技術です。もともとウイルス学的アッセイと呼ばれるプラークアッセイが、バクテリオファージの感染性を測定およびカウントするために開発されました。 Biology-online.orgによると、後に哺乳類のウイルス数にも適用されました。

1. 事実

   • プラークは、細胞のコンフルエントな単層培養です。 Biology-online.orgによると、単一のウイルス粒子による細胞の1つの感染の結果として形成されます。細胞が感染すると、ウイルスは複製し、最終的に細胞を殺します。さらに、新しく複製されたウイルス粒子が広がり、感染し、近くの細胞に感染し、殺します。

   関数

   • プラークアッセイでは、培養物は最初に特定の染料で染色されます。 Biology-online.orgによると、このダイは生存可能な（生体）細胞のみを染色します。その結果、染色された背景に対して、死んだ細胞は培養に染まっていないように見えます。現在、プラークアッセイは、溶血によって赤血球を破壊する抗体を生成する細胞を検出するために適用されています。

   機能

   • 赤血球は、ヘモグロビンを含む細胞（赤血球とも呼ばれます）であり、肺および組織からの血液中の酸素と二酸化炭素を輸送します。 Biology-online.orgによると、溶血は、赤血球が開いてヘモグロビンを壊して放出すると発生します。その結果、プラークアッセイでは、基礎は明確なプラークであり、赤血球が抗体によって溶血していることを示しています。

   メソッドパートI

   • ウイルスストックの10倍の希釈液は、プラークアッセイを行う前に調製され、0.1mlのアリキアが細胞単層に置かれます。この混合物は、ウイルスが細胞を攻撃する時間を持つように期間インキュベートされます。さらに、単層は、「ウイルスの検出：プラークアッセイ」によると、ヴィンセントラカニエッロによる物質（通常は寒天）を含む栄養媒体で覆われています。栄養培地はゲルを形成し、培養がインキュベートされた後、元の感染細胞がウイルスの子孫を放出します。ゲルはウイルスの広がりを周囲の細胞に制限し、その結果、感染性粒子はプラークと呼ばれる円形ゾーンを生成します。時間が経つにつれて、プラークは肉眼で見えるサイズに成長し、染料は視聴を強化するために使用されます。

   メソッドパートII

   • ウイルス力価は、ミリリットルあたりPFUと呼ばれるプラーク形成ユニットで計算されます。それらはカウントされ、エラーを最小限に抑えるために、10〜100個のプラークを含むプレートのみがカウントされます。さらに、「ウイルスの検出：プラークアッセイ」によれば、100個のカウントされたプラークごとに、同じ力価がプラスまたはマイナス10％によって異なります。したがって、正しく実行すると、プラークアッセイの推定誤差は約10％です。