トリス‑トリシン バッファーの使用プロトコル

トリス‑トリシンは白色結晶性粉末で、分子生物学の実験でバッファー溶液として使用されます。この有機化合物は水に可溶で酸性が低く、ゲル電気泳動などの手法で、分析溶液のpHを調整するために利用されます。トリス‑トリシンを用いたプロトコルには、Tris‑tricine バッファーでの SDS‑PAGE、トリス‑トリシンゲルの作製、低分子量タンパク質の分離などがあります。

トリス‑トリシンバッファーを用いた SDS‑PAGE

SDS‑PAGE（十二烷基硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動）は、タンパク質を小規模に分離するために広く用いられる手法です。ブリント・アーヴァイン（Queen's University Belfast）氏は『Neuropeptide Protocols』で、アクリルアミドを水に溶解し、温度を 39.2°F（約4°C）に保つことから始めると述べています。その後、Tris‑tricine、塩酸、メルカプトエタノール、SDS を加えてゲル溶液を調製します。調製したゲルは、タンパク質分離に特化した電気泳動装置にセットして使用します。

トリス‑トリシンゲルの作製

ワシントン大学のプロトコルに基づき、一般的な電気泳動実験で使用するトリス‑トリシンゲルを作製します。まず、アクリルアミド溶液、Tris‑tricine、塩酸、SDS、蒸留水を混合します。続いて、ゲルの気泡除去のためにグリセロールを加え、真空下で最大 15 分間脱気します。その後、過硫酸アンモニウムと四甲基エチレンジアミン（TEMED）を加えて撹拌し、最後に水飽和イソブチルアルコールを加えてゲルを完成させます。

低分子量タンパク質の分離

低分子量タンパク質の分離には、Tris‑tricine バッファーが重要な役割を果たします（Ian M. Rosenberg『Protein Analysis and Purification: Benchtop Techniques』）。電気泳動用 Tris‑tricine 溶液を調製する際は、TEMED、染色料のコマシーブルー、アクリルアミド・ビスアクリルアミド、塩酸、グリセロール、SDS を加えます。ゲル化は約 1 時間で完了し、タンパク質サンプルは 104°F（約40°C）で 30 分間インキュベートした後、電気泳動で分析します。