ジニトロサリチル酸（DNS）を用いた血糖測定手順
概要
ジニトロサリチル酸（DNS、3,5-ジニトロサリチル酸）は、特にグルコースの糖量測定に用いられる試薬です。血液や脳脊髄液など人体液中の糖を迅速に評価でき、10分程度で結果が得られ、試薬は安価で安定しています。血糖値の測定や糖尿病診療に広く利用されています。
必要なもの
- 3,5-ジニトロサリチル酸（17.5 g）
- 60°Cの熱蒸留水（1,000 ml）
- フィルター紙
- 漏斗
- 飽和ベンゾ酸中の1％標準グルコース溶液
- 蓋付き容器（100 ml以上）
- フェノール（13.8 g）
- 重亜硫酸ナトリウム（13.8 g）
- 10％水酸化ナトリウム溶液（350 ml）
- カリウム・ナトリウム酒石酸塩（510 ml）
- 常温の水（180 ml）
- ピペット（0.1 mlまたは0.2 ml）
- 沸騰水浴
- 加熱用実験機器
- 微量固体・液体測定用実験機器
手順
3,5-ジニトロサリチル酸 17.5 g を 60°C 前後の熱蒸留水 1,000 ml に入れ、撹拌して溶解させます。フィルター紙と漏斗で濾過し、25°C で保存します。この溶液は Lee's Reagent A と呼びます。
飽和ベンゾ酸中の1％グルコース溶液を、1.75％の Lee's Reagent A 100 ml に加え、蓋付き容器を上下に逆さにしてよく混合します。25°C で保存します。
13.8 g のフェノールと 13.8 g の重亜硫酸ナトリウムを 10％ 水酸化ナトリウム溶液 350 ml に溶解させます。この溶液を、180 ml の水に溶解した 510 g のカリウム・ナトリウム酒石酸塩に加え、濾過します。室温で保存し、Lee's Reagent B と呼びます。
毛細血管穿刺で採取した血液を、0.1 ml または 0.2 ml のピペットで採取します。0.1 ml を測定する場合は 0.1 ml ピペットの方が定量的に正確です。一方、0.2 ml を測定する際は 0.2 ml ピペットの方が適しています。
ピペットで採取した血液を、試験管内のグルコース‑DNS 溶液に加えます。血液と溶液の比は 1:20 とし、ピペットを上下に動かして均一に混合します。ピペットはそのまま溶液中に残し、1〜2 時間放置して沈殿した固形物を取り除きます。
上澄み液に Lee's Reagent B を同量加え、沸騰水浴で最低 3 分間加熱します。
得られた赤色を、標準グルコース溶液で得られる色と比較します。