クロラムフェニコールプレートの調製
クロラムフェニコールは、分子生物学実験の研究研究所で役立ちます。クロラムフェニコールがプレート上で調製されると、細菌濃度を検出するか、さらなる実験のために細菌の特定の株を分離するために使用できます。
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必要なもの
- 蒸留水
- クロラムフェニコール
- 1.0％のトリプトン
- 0.5％酵母抽出物
- 1.0％塩化ナトリウム（NaCl）pH 7.0
- 95％エタノール
- 寒天
- 2リットルフラスコ
- 磁気攪拌プレート
- 中サイズの磁気攪拌
- ラテックスまたはニトリル手袋
- 実験室スケール
- autoclave
- 30滅菌10 cmプレート
- ブルーマーキングペン
- parafilm
- アルミホイル
- オートクレーブテープ
手順
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- 1
LBスープを準備するために、ラテックスまたはニトリルグローブのペアを着用します。 LBスープは、溶原性スープまたはロリアスープの一般的な略語であり、細菌を培養するための成長媒体として使用されています。実験室でゼロから作ることができます。また、時間を節約するために、分子生物学の株式サプライヤーから購入できます。
- 2
計量紙のシートをスケールに置きます。紙の重量が最終重量に含まれないように、スケールのゼロボタンを押します。 10 gに達するまで、一度に少量のトリプトンを追加します。次に、中央のトリプトンを使用して、計量紙を半分に折ります。計量紙を拾い、折り畳まれた紙を漏斗として慎重に使用して、トリプトンを2 Lフラスコに追加します。この手順に従って、5 G g酵母抽出物、10 gのnaCl、15 gの寒天の重量に従ってください。
- 3
攪拌棒をフラスコに落とし、磁気攪拌プレートのフラスコを中央に置きます。溶液を最大1リットルにするのに十分な蒸留水を追加します。
- 4
炒め物をオンにし、攪拌棒を見ます。プレートは、フラスコの側面に引っかかっていない状態で攪拌棒が適度なペースで移動できるように、適切な速度でセットする必要があります。必要に応じて設定を調整します。すべての試薬が溶解するまで、溶液をプレートに置くようにします。
- 5
攪拌板をオフにし、3インチの正方形のパラフィルムをフラスコの上に伸ばし、汚染物質やこぼれからフラスコを覆い保護します。 次に、パラフィルムをアルミホイルで覆い、ホイルの上にオートクレーブテープをマーキングします。
- 6
液体サイクル上のオートクレーブに15 psiで20分間置いて、滅菌します。
- 7
オートクレーブからフラスコを取り外します。とても暑くなります。溶液を約55度まで冷却し、室温に置くか、フラスコを65度の摂氏水浴に入れてください。
- 8
汚染を防ぐために、95％のエタノールで作業面をスプレーして拭き取ります。プレートを処理する前に手袋を変更することも良い考えです。
- 9
マーキングペンを使用して、各プレートの側面と蓋を垂直の青いバンドでマークします。これは、プレートにLBスープとクロラムフェニコールが含まれていることを示しています。
- 10
十分なクロラムフェニコール抗生物質を溶液に加えて、濃度があなたが働く細菌に応じて望ましい量に達するようにします。一般的な最終濃度は100UG/mLです。この濃度には、1mlのクロラムフェニコールストック（25mg/ml）を追加します。フラスコを円の動きで渦巻かせるか、マグネット攪拌プレートに1〜2分間置き、よく混合されていることを確認してください。
- 11
フラスコの口をエタノールで拭き取り、溶液が溶液の途中で満たされるまで溶液をプレートに注ぎます。プレートを硬化させ、各プレートをふたで覆い、4度摂氏に逆さまに保管して、乾燥しないようにします。
- 1