クロラムフェニコール培地プレートの作り方
概要
クロラムフェニコールは広範囲に作用する抗生物質で、細菌のタンパク質合成を阻害し増殖を抑制します。もともとはヒトの感染症治療薬として開発されましたが、重篤な副作用（再生不良性貧血、低形成性貧血、血小板減少症、顆粒球減少症）により、現在は他の薬が効かない場合の最終手段として限定的に使用されています。
研究室では、クロラムフェニコールを含む培地プレートを作成し、細菌濃度の測定や特定株の分離に利用します。
必要なもの
- 蒸留水
- クロラムフェニコール
- 1.0% トリプトン
- 0.5% 酵母エキス
- 1.0% 塩化ナトリウム (NaCl) pH 7.0
- 95% エタノール
- アガー
- 2リットルフラスコ
- 磁気撹拌プレート
- 中型磁気撹拌棒
- ラテックスまたはニトリル手袋
- ラボ用はかり
- オートクレーブ
- 無菌10 cm プレート（30枚）
- 青色マーキングペン
- パラフィルム
- アルミホイル
- オートクレーブテープ
手順
手袋を装着し、LBブロス（リゾーシェンブロス）を調製します。市販の培地キットを使用しても、自作しても構いません。
計量紙をはかりに載せてゼロ点を合わせ、トリプトンを少量ずつ加えて合計10 gになるまで計量します。計量紙を半分に折り、ファンネル代わりにして2 L フラスコに移します。同様に酵母エキス5 g、NaCl10 g、アガー15 gも計量し、フラスコに入れます。
撹拌棒をフラスコに入れ、磁気撹拌プレートの中央に置きます。蒸留水を加えて全体の体積を1 L に調整します。
撹拌プレートのスイッチを入れ、撹拌棒が壁にくっつかずに適度に回転する速度に設定します。全ての固形成分が完全に溶解するまで撹拌を続けます。
撹拌を止め、フラスコの口に約7.5 cm 四方のパラフィルムをかぶせ、さらにアルミホイルで覆います。その上にオートクレーブ用テープを貼り、識別できるようにします。
フラスコをオートクレーブに入れ、液体サイクルで15 psi（約1 atm）で20分間滅菌します。
オートクレーブからフラスコを取り出します（非常に熱い）。室温で自然に冷ますか、65 °C の水浴に入れて約55 °C まで冷却します。
作業台を95% エタノールでスプレーし拭き取り、汚染防止を徹底します。プレートを扱う前に手袋を交換してください。
各プレートの側面と蓋に青色の縦帯をマーキングペンで描き、クロラムフェニコール含有 LB ブロスであることを示します。
クロラムフェニコールを加えて最終濃度を調整します。一般的な使用濃度は 100 µg/mL で、25 mg/mL のストック溶液を 1 mL 加えます。フラスコを円形に回転させるか、再度磁気撹拌プレートで 1〜2 分間撹拌し、均一に混合します。
フラスコの口をエタノールで拭き、培地を無菌 10 cm プレートに半分まで注ぎます。固まるまで放置し、蓋をして逆さまに 4 °C で保存し、乾燥を防ぎます。