マイクロソーム調製手順

細胞内部は非常に複雑です。核に加えて、エンドプラズミックレティクulum(ER)という多数の膜があり、代謝機能を担っています。細胞を破砕すると、ER由来の小さな小胞であるマイクロソームが生成されます。

方法

  • 超音波破砕装置、凍結・解凍サイクル、ホモジナイザー、界面活性剤、または大規模サンプルの場合はブレンダーなど、様々な方法で細胞を破壊します。
  • まず低速遠心で大きな破片(核や未破砕細胞)を沈殿させ、これらは除去します。
  • 次に上清を高速遠心し、マイクロソームを沈殿させます。得られたペレットは緩衝液に再懸濁し、実験に使用します。

考慮事項

  • 細胞種の選択が重要です。例えば肝臓組織は血液汚染を除去するために灌流が必要です。
  • 対象分子の安定性に合わせた温度管理が求められます。
  • マイクロソームはサイズにより分画できるため、遠心速度の設定が目的とする分画に大きく影響します。

用途

薬物代謝の研究
薬物代謝はマイクロソームで研究できる。

研究者はマイクロソームを用いて、様々な細胞種に特有の代謝経路を特定・解析します。特に肝臓は動物の主要な代謝臓器であるため、製薬業界では肝マイクロソームを使用して薬物代謝を評価することが一般的です。

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