n端子シーケンスプロトコル

エドマン分解 - タンパク質のN末端アミノ酸を識別するためのよく知られているプロセス - には、アミノ酸の切断が必要であり、その後クロマトグラフィーまたは電気泳動を使用した同定が必要です。自動化されたプロセスは、N末端シーケンスを加速します。

1. 事実

   • 個々の細胞内で産生されるタンパク質は、ホルモン、酵素、その他の重要な調節因子として作用します。異常なタンパク質をもたらす遺伝的変異は、深刻な健康への影響を与える可能性があります。

   プロセス

   • N末端アミノ酸は、いくつかの試薬の1つで処理することにより切断され、加水分解して別のアミノ酸を形成します。薄層クロマトグラフィー、HPLC、または電気泳動はアミノ酸のサイズを決定し、既知のサイズの標準と比較します。残りのタンパク質の新しいN末端は、同様に識別のために切断できます。

   自動化

   • 応用バイオシステムは、精製されたタンパク質を膜に結合し、フェニルイソチオシアネートで処理するエドマン分解の自動化の発達を主導しました。自由アミノ酸は、識別のためにHPLCシステムに自動的に注入されました。

   合併症

   • タンパク質は、N末端アミノ酸を正確に決定するために、比較的純粋で汚染物質のないままでなければなりません。エドマンの分解制限では、50アミノ酸がなくなった小さなペプチド鎖に断片化された大きなタンパク質分子が必要です。