T細胞培養プロトコル

リンパ球と呼ばれる免疫細胞のファミリーに属するT細胞は、適応免疫応答中に生成されます。 T細胞は骨髄幹細胞に由来し、胸腺で成熟します。 T細胞にはいくつかの異なるタイプがあり、それぞれ異なる機能を備えています。 T細胞は、付着したT細胞抗原受容体によって互いに区別されます。 T細胞のサブセットはCD4マーカーを搭載し、免疫応答を誘導するのに役立ちます。

1. T細胞のソース

   • T細胞は、脾臓、リンパ節、胸腺などのさまざまなソースから入手できますが、末梢血は、培養目的で最も容易に利用可能なT細胞のソースです。血液サンプルは、感染剤やその他の汚染物質について徹底的にスクリーニングされ、安全キャビネットの下で慎重に扱われます。 T細胞は、毒性測定や免疫学的ワクチン反応を研究するなど、いくつかの理由で培養されます。

   分離

   • T細胞は赤血球などの赤血球よりも密度が低いため、遠心分離によって抽出されるため、T細胞は一般に全血サンプルから密度勾配分離によって分離されます。適切なニュートラル塩溶液が血液サンプルに添加され、その後にficoll等節溶液が続きます。 Ficoll等骨はT細胞よりも大きいが、赤血球よりも少なく、遠心分離中に両方の細胞間に中層を形成するため、T細胞を上から除去できます。 T細胞はさらに遠心分離され、上清が除去され、細胞の生存率を決定するために小さなアリコートがカウントされます。細胞は、実験に直接使用されるか、将来の使用のために凍結保存されます。

   凍結保存

   • 凍結保存試薬は、室温でのT細胞分解を避けるために事前に準備されています。不可能な場合、細胞は氷の上に保管されているか、冷蔵されます。試薬は、細胞培養培地と10〜13％のヒト血清アルブミン（HSA）タンパク質、および細胞培養培地と10％のジメチルスルホキシド（DMSO）で構成されています。 DMSOは、凍結、pHの変化、および凍結に関連する電解質濃度の変化を最小限に抑えます。 T細胞は、試薬を含む細胞培養培地およびHSAにCryotubeのHSAに再懸濁されます。試薬を含むDMSOは、細胞にゆっくりと添加され、静かに渦巻いています。次に、細胞をイソプロパノールを含む凍結容器に移し、緩やかな温度が低下して保存されます。

   解凍

   • T細胞が解凍されると、クライチューブが貯蔵から除去され、摂氏37度でインキュベートされます。その後、2倍の体積に到達し、別のチューブに移され、遠心分離されるまで、適切な解凍培地が細胞にゆっくりと追加されます。ベンゾナーゼは、死んだT細胞の凝集を防ぐために、解凍培地に添加されることがあります。遠心分離されたペレットは細胞培養媒体で応答し、細胞生存率が評価されます。 T細胞は、それぞれの実験に使用する準備ができています。