分析のためにDNAを並べるにはどうすればよいですか？
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必要なもの
- アガロースゲル、0.7％から2％
- tris-borate-edta（TBA）、トリスアセテート-EDTA（TAE）、酢酸リチウム（LA）、ホウ酸（SB）バッファー
- 臭化エチジウム
- ゲルロード染料
- ゲルトレイ
- 電気泳動チャンバー
- グローブ
- 保護アイウェア
- ピペット
- 電気泳動comb
手順
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0.7％のアガロースゲルの準備
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0.7グラムのアガロースパウダーを計量してから、大きな（250 ml）円錐形のフラスコに入れます。
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1x（通常の強度）バッファー（TAE、TBE、SB、またはLBバッファー）をアガロース粉末を含む円錐形のフラスコに加えます。
- 3
溶液が透明になり、アガロースが溶解するまで、ブンセンバーナーを約1分間使用して電子レンジまたは熱を使用します。
- 4
熱源からフラスコを取り外し、55〜60度まで冷却してください。
- 5
適切なサイズのピペット（通常は1ml）を使用して、1 µL（マイクロリットル）の臭化エチジウムを冷却アガロース溶液に加えます。混合するための解を渦巻く。
- 6
ゲルをゲルトレイにゆっくりと注ぎ、このプロセス中にバブル形成がないようにします。ゲルトレイの井戸ダムが提供されていない場合は、マスキングテープを使用してそれらを形成します。
- 7
電気泳動をゲルに慎重に櫛で入れ、しっかりした位置を確保し、正しい方向にします。電気泳動の櫛は、それらが持っている歯の数によって大きく異なる場合があります。ゲルを約25分間設定します。
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Agaorseソリューションの調製に使用される同じバッファーでゲルを浸します。この場合、1xバッファー。ゲルを最大5 mLの実行バッファーで浸します。
分析のためのアガロースゲルへのDNAの調製と負荷
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サンプルの5〜10 µlを反応チューブから新鮮なチューブに移します。反応混合物全体を使用する場合、新鮮なチューブは必要ありません。
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負荷のためにDNAサンプルを含む新鮮なサンプルチューブのそれぞれに0.2x負荷バッファーを追加します。
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電気泳動をゆっくりと取り外して、ゲルを壊さないか、ゲルの底部とゲルトレイの間にスペースを作成しないようにします。
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電気泳動櫛によって作成された最初のウェルに、適切なDNAマーカーを5〜12 µLします。 DNAマーカーが適切であるかどうかは、サンプルに期待しているフラグメントのサイズに依存します。
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残りのウェルにサンプルを5〜10 µLし、同じ量の同じDNAマーカーを最終ウェルに追加します。
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ワイヤを正しいソケットにチャンバーに入れて、電極を50〜150 v。
に設定して、電極を電気泳動チャンバーに置きます。 - 15
ゲルを1〜4時間実行します。
結果の分析
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ジェルチャンバーからジェルを取り外し、視覚識別のためにUVルームに配置するか、ゲルの写真を撮ることができるマシンに入れます。
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井戸の移動のマーカー距離を測定します。
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セミロッググラフペーパーでバンドのサイズに対する距離をプロットし、最適なラインを描きます。
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未知のバンドの距離を計算します。
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最適なラインを満たす未知のバンドが移動した遠くからラインアップを描くことで、未知のバンドのサイズを推定します。
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この出会いポイントからサイズ軸まで別の行を描きます。
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