アリウムCEPAテストの実行方法
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必要なもの
- タマネギ
- ナイフ
- 水
- 液体と玉ねぎを保持するためのビーカーまたはその他の容器
- 液体をテスト
- かみそりの刃またはメス
- vials
- アセトアルコール固定
- 顕微鏡スライド
- カバースリップ
- 塩酸
- ステンレス鋼の浸漬ロッド
- carbol fuchsin stain
- aceto-orcein stain
- 酢酸
- カナダバルサム
- 光顕微鏡
- 顕微鏡のカメラアタッチメント
手順
-
テストのセットアップ
- 1
12個の玉ねぎの外側の乾燥肌を取り除きます。根が出現する領域を損傷することなく、底のプレートの周りにタマネギの底をこすります。
- 2
玉ねぎの底をテスト液に浸したほど幅の広い口を持っているビーカーを選択します。ビーカーに蒸留水を満たし、水と接触しているビーカーに玉ねぎを置きます。ビーカーの側面をアルミホイルで保護して、地下の暗闇をシミュレートします。毎日水を交換します。
- 3
2日後にタマネギのベースを調べます。根が形成されるべきでした。根の成長を評価し、2つの玉ねぎを最も弱い根の成長で破棄します。
- 4
廃水や産業流出など、テストする材料のサンプルをそれぞれ含む5つのビーカーの2番目のシリーズをセットアップします。 5つの玉ねぎをこれらのビーカーに入れます。他の5つをテスト制御として蒸留水に保持します。根をさらに24時間成長させます。
根の準備
- 5
メスルペルまたはカミソリの刃を使用して、各タマネギから5〜6個の根の先端を収穫し、コントロールであり、記録された被験者である録音を収穫します。個々の玉ねぎからの根を小さなラベル付きバイアルで分離してください。
- 6
アセトアルコールの根の先端をすぐに1：3の比率で修正します。タマネギの根の先端を顕微鏡スライドに置き、1N塩酸と同じ1N塩酸で浸漬します。これは、1極塩酸と同じで、60度の摂氏3分間です。フェノールと塩基性フクシンの混合物であるCarbol Fuchsin染色での染色の浸潤されたヒントは、細胞壁の元素に結合して光学顕微鏡下でより目立つようになります。
- 7
4％の酢酸に2％のアセトオルセイン染色を加えます。これは染色体を色付けします。浸透しているロッドでかき混ぜます。カバースリップを適用し、それを押し下げてルートの先端をつぶします。エッジをすばやく乾燥させる指のポリッシュでエッジを密封するか、カナダのバルサム、エッセンシャルオイルまたはキシレンのいずれかを混ぜたバルサムファーツリーからの樹脂に恒久的に取り付けます。結果が記録されるようにスライドに番号が記録されますが、それぞれがテストサブジェクトであるかコントロールであるかは明らかではありません。
結果の記録
- 8
顕微鏡スライドを光顕微鏡の段階に置きます。低い倍率の下でフィールドを調べ、染色体を調べるために高倍率に切り替えます。
- 9
データシートに染色体異常を記録し、各タマネギのコード化された数で情報を記録します。不完全に分離または壊れた染色体、小核（染色体破片を含む可能性のある細胞分裂の末端近くに形成される余分な核）、染色体リング、細胞分裂のさまざまな段階で粘着性および乱れた染色体を含めます。各スライドを撮影します。
- 10
統計分析を使用してデータを分析します。結果を解釈して、テストソリューションが遺伝毒性であるかどうかを評価します。
- 1