アリウム（タマネギ）根端染色体試験の実施手順
アリウム（Allium cepa）根端染色体試験は、発根したタマネギの根先が試験物質に直接触れさせることで、環境中の有害性を評価する方法です。根先は一定時間曝露後に取り出し、固定・染色・細胞破砕して光学顕微鏡で染色体を観察します。染色体異常や細胞分裂異常が認められた場合は、試験液が遺伝毒性を持つと判断します。
必要なもの
- タマネギ（12個）
- ナイフ
- 水（蒸留水）
- ビーカーまたは液体・タマネギを入れる容器
- 試験用液体（廃水・工業排水など）
- カミソリまたはメス
- 小瓶（ラベル付）
- 酢アルコール固定液（1:3）
- 顕微鏡スライド
- カバーガラス
- 塩酸（1N）
- ステンレス製細胞破砕棒
- カルボフチシン染色液
- 酢オルセイン染色液（2%）
- 酢酸（4%）
- カナダバルサム（封入剤）
- 光学顕微鏡
- 顕微鏡用カメラ（撮影用）
手順
試験の設定
- タマネギ12個の外側の乾燥皮を除去し、根が出る底部のプレート部分を傷つけないように慎重に削ります。
- 底部が入るだけの口径のビーカーを用意し、蒸留水で満たします。タマネギを水に浸し、ビーカーの側面はアルミホイルで覆って暗所（地下）を再現します。水は毎日交換します。
- 2日後にタマネギの根部を確認し、根が伸びていることを確認します。根の伸長が最も弱い2個は除外します。
- 残りの10個を2つのグループに分けます。5個は試験液（廃水や工業排水）を入れたビーカーに、残り5個は蒸留水のみのビーカーに入れ、さらに24時間根を伸ばします。
根の採取・処理
- メスまたはカミソリで、各タマネギから5～6本の根先（根端）を採取し、対照群と試験群を区別できるようにラベル付けした小瓶に入れます。
- 採取した根先はすぐに酢アルコール（1:3）で固定します。その後、1N塩酸を加え、60℃で3分間加熱しながら細胞壁を柔らかくします。
- カルボフチシン染色液で染色し、続いて酢オルセイン染色液（酢酸4%中に2%）を加えて染色体を可視化します。細胞破砕棒で軽く混ぜ、カバーガラスを掛けて根先を押しつぶします。エッジは速乾性リップクリームで封止するか、カナダバルサムで永久封入し、スライドに番号を付けて管理します。
結果の記録と解析
- 顕微鏡のステージにスライドを置き、低倍率で全体を確認し、必要に応じて高倍率で染色体を観察します。
- 各スライドごとに染色体異常（分離不全、破断、ミクロ核、環状染色体、粘着染色体など）をデータシートに記録し、写真撮影も行います。
- 収集したデータを統計解析し、試験液が遺伝毒性を示すかどうかを評価します。