レトロウイルス感染プロトコル

カプシドおよび脂質エンベロープにカプセル化されたRNAゲノムを含むレトロウイルスには、感染する宿主細胞の膜の受容体にそれらをリンクするのに役立つポリペプチド鎖が含まれています。 ほとんどの細胞の遺伝性情報はDNAでコード化されていますが、レトロウイルスのそれはRNAに含まれています。また、レトロウイルスは酵素逆転写酵素を運び、宿主DNAに接着することができます。特定のプロトコルに続いて、これらのウイルスによるDNA細胞の意図的な感染症の研究所が続きます。

1. 実験室の準備

   • レトロウイルス感染のプロセスを支援するためには、特定の実験装置と物資が必要です。 機器には、1つのピペットエイド、1つのピペットマン、1つの組織培養フード、37度の摂氏、32度摂氏インキュベーター、およびエッペンドルフ遠心分離機が含まれます。物資には、組織培養プレート、使い捨てのパスツールピペット、適格なレトロウイルス上清、フィルター施行ポリブレン、ろ過されたプロタミン硫酸塩が含まれます。

   感染のために細胞を準備

   • 感染の前に、標的細胞を組織培養プレートに分割し、5パーセントCO2の37度摂氏インキュベーターで一晩インキュベートする必要があります。インキュベーション期間の目的は、50％コンフルエントのセルを作成することです。細胞が感染プロセスのために最適化されることを保証するために、細胞を事前に調製する必要があります。 スタンフォード大学のノーラン研究所は、細胞感染が常にNIH 3T3細胞に感染することから始めることを推奨しています。テストの結果を最適化するのに役立つ。

   細胞に感染

   • インキュベーション期間が終了した後、研究者は細胞が健康で正しい合流の両方であることを確認する必要があります。組織培養のフードを使用して、細胞物質を吸引し、細胞にウイルス上清が適用されます。適用したら、プレートを均等に分布させることを確認するために、プレートをやっと前後に揺らします。次に、細胞をエッペンドルフ遠心分離機に入れ、摂氏30度の温度で90分間2,500 rpmで回転させることにより、スピン接種する必要があります。 その後、細胞を摂氏32度で1〜2日間インキュベートする必要があります。次に、ウイルスを抽出された細胞に置き換え、インキュベーターに入れて、最初の感染症の3〜7日後に分析します。