酸速染色の目的は何ですか？

微分染色

通常の細菌を染色するには、スライドに液体染料を約1分間掛け、流水で洗い流します。微分染色は、同一スライド上の2種類の細菌に異なる染料を使用する方法です。例えば、グラム染色では、まず結晶紫とヨウ素で染色し、アルコールで脱色します。グラム陽性菌は最初の紫色を保持し、グラム陰性菌は無色になります。その後、対照色（例：サフラニン）で再染色し、グラム陰性菌はピンクに染まります。

歴史

一部の細菌は脂質で構成された厚い細胞壁を持ち、ワックス状でほぼ防水です。そのため、通常の染料は細胞内に浸透できません。1880年代、結核菌（Mycobacterium tuberculosis）を研究しようとした科学者は、通常のグラム染色では24時間浸漬しなければ染色できないことに直面しました。後に梅毒に有効な薬を開発したポール・エーリッヒは、染料を細菌内部に強制的に浸透させる「酸速染色法」を考案しました。当時は45分で染色でき、現在の技術では約5分で完了します。

方法

主染料（通常はカルボールフチシン）を細菌に浸透させるため、スライドを沸騰した水の上で5分間加熱しながら染料を絶えず掛け続け、乾燥させません。加熱せずに済む方法として、加熱不要の改良型キニョンカルボールフチシン染色がありますが、この場合も染料に5分間浸す間はスライドが乾かないように注意が必要です。一次染色後は酸性アルコールで脱色し、二次染色として異なる色の対照染料で再染色します。酸性アルコールで脱色しても一次染料が残る細菌は「酸速性（acid‑fast）」と呼ばれます。

取り扱い上の注意（対象菌）

結核菌は極めて危険で、専用の隔離室や転送フードを備えた医療施設でのみ取り扱われます。学術ラボでの使用は法律で禁じられています。その代わりに、細胞壁が薄いMycobacterium smegmatisが実験に用いられますが、染色が過度に脱色されやすいため注意が必要です。

取り扱い上の注意（手順）

カルボールフチシンの蒸気は有毒です。加熱する際は必ずフード内で作業し、外部へ排気してください。加熱を避けたい場合は、フェノールとフチシンの濃度が高いキニョンカルボールフチシンを使用すれば、加熱せずに細菌内部へ染料を浸透させることができます。