ELISA法による抗体検出の手順

ELISA（酵素免疫測定法）は、抗体の有無を調べるために最も広く利用されている商業検査です。薬物検査、妊娠判定、エイズや肝炎などの診断に活用され、操作が簡単でコストも低いことから人気があります。

必要なもの

• 血清サンプル
• ELISAプレート
• 検出したい抗体に対する抗原（抗体と結合させるためのもの）
• 酵素標識二次抗体または酵素標識抗体
• 酵素標識色変化指示薬
• ペーパータオル
• 保護メガネ

手順

1. 複数のウェルの表面に既知の抗原をコーティングします。

   各ウェルに50 µLのIgG溶液を加え、5分間静置します。その後、流水で洗浄し、5回繰り返します。最後にペーパータオルで軽くたたいて乾かし、ウェルを拭かないようにします。

2. 血清サンプルをプレートに加えます。血清は希釈して、ステップ1でコーティングした抗原と結合できるようにします。抗体が存在すれば抗原に結合します。

3. カゼインなどのブロッキングタンパク質をウェルに加え、目的以外のタンパク質がプレートに付着するのを防ぎます。

4. 流水で優しく洗浄し、ペーパータオルで余分な水分をたたき落とします。この洗浄を計5回繰り返し、結合していない抗原を除去します。その後、検出したい一次抗体（酵素標識抗体）をウェルに加えます。

5. 再度流水で洗浄し、結合していない一次抗体を除去します。

6. 酵素標識二次抗体（抗抗体）をウェルに加えます。二次抗体は一次抗体に結合し、色変化指示薬と結合した酵素を持っています。

7. 再度流水で洗浄し、結合していない二次抗体を除去します（計5回）。

8. 酵素標識色変化指示薬を加えます。抗体と抗原が結合したウェルだけが色変化します。

9. ウェルの色変化を観察し、血清中に目的の抗体が存在するかを判断します。