タンパク質分離のための細胞溶解プロトコル

細胞溶解

• 細胞溶解では、細胞膜が破裂します。

  「溶解（lysis）」はギリシャ語で「緩める」を意味します。細胞膜を構成する力が破壊され、膜が破裂し、細胞内の内容物が溶液中に放出されます。目的のタンパク質もこのとき解放され、通常はリシスバッファーと呼ばれる化学溶液を加えて行います。

リシスバッファーの調製

• バッファーの選択は細胞種、タンパク質、用途に依存します。

  市販の様々なリシス溶液が利用できるほか、一般的な試薬で自作することも可能です。最適なバッファーは細胞種や目的タンパク質、最終的な用途により異なりますが、一般的には界面活性剤（例：NP-40、Triton‑X）で膜を溶解し、緩衝剤、キレート剤、プロテアーゼ阻害剤を加えて、タンパク質が損傷しないようにします。

溶解条件

• 氷冷条件で行うことで目的タンパク質の損傷を防ぎます。

  リシスバッファーは通常氷冷状態で使用し、溶解プロセスも低温で行います。容器を軽く揺すって細胞とバッファーを均一に混合し、5〜10分間反応させた後、過剰な酵素活性を止めるために中和します。これによりタンパク質の劣化と不要なデブリの生成を最小限に抑えます。

その他の溶解方法

• 機械的な力でも細胞を破壊できます。

  化学的溶解が最も穏やかで一般的ですが、場合によってはより激しい機械的手法が必要です。超音波破砕、凍結・解凍サイクルの繰り返し、ホモジナイザーによる粉砕などがあります。各手法の適用は文献を参照し、目的に合ったものを選択してください。