タンパク質分離のための細胞溶解プロトコル

小さなタンパク質は合成的に調製できますが、多くの理由で、細胞自体よりも優れた合成機構はありません。通常、タンパク質分離の最初のステップは細胞溶解です。

1. 細胞溶解

   • <図>
     細胞溶解では、細胞破裂の周りの膜。

     「溶解」という言葉は、「緩める」という意味のギリシャ語の根から来ています。細胞溶解では、細胞膜を一緒に保持する力が破壊され、破裂します。次に、細胞の内容物は、目的のタンパク質を含む周囲の溶液に放出されます。通常、これは溶解バッファーと呼ばれる化学溶液を追加することによって行われます。

   溶解バッファーの準備

   • <図>
     溶解バッファーの選択は、細胞型、タンパク質、アプリケーションに依存します。

     さまざまな溶解ソリューションが商業的に利用可能であるか、一般的なレシピを使用して、一般的な化学物質からの溶解バッファーを調製することができます。使用するのに最適なバッファーは、使用される細胞型、分離するタンパク質、および最終的な用途によって異なりますが、一般に、溶解溶液には、細胞膜を溶解する洗剤分子（しばしばNP-40またはTriton-X）が含まれ、バッファー、キケロ、プロテアーゼ阻害剤を溶解して、保護環境からの環境からの障害からの障害からの障害を防ぐことを防ぐことができます。

   溶解条件

   • <図>
     氷の冷却条件下で溶解を実行すると、目的のタンパク質への損傷が防止されます。

     溶解バッファーは通常、氷のように使用され、溶解プロセスは寒い条件下で進行することが許可されています。このソリューションは、細胞や溶解産物の分散を促進するために穏やかに揺れます。約5〜10分後、溶解溶液は通常中和され、さらなる活動を防ぎます。これらの予防措置は、タンパク質の損傷を減らし、後で除去する必要がある生成される外部の残骸の量を減らします。

   その他の溶解方法

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     機械的な力もセルを溶解することができます。

     化学溶解は最も穏やかで一般的に使用されていますが、溶解細胞のためのより厳しい機械的方法を使用することができます。これらには、超音波処理、繰り返しの凍結融解サイクル、均質化が含まれます。これはマッシングプロセスです。あなたの特定のケースに最も適切な方法を見つけるために技術文献を参照してください。