グラム染色の各ステップと使用試薬

1884年にオランダの微生物学者が開発したグラム染色は、細菌をグラム陽性・陰性に分類するための基本的な検査です。染色過程では、色素と固定剤、脱色剤、対色染料の4つの試薬を順に使用します。

1. 紫色染料（クリスタルバイオレット等）

• 最初に細胞にクリスタルバイオレット、メチルバイオレット、またはジーン・バイオレットなどの紫色染料を加え、細菌の細胞壁に色を付着させます。

2. ヨウ素（モルダー試薬）

• 染料と同時にヨウ素を加えることで、染料と細胞壁の結合が強化され、すべての細菌が紫褐色に染まります。

3. 脱色剤（エタノールまたはアセトン）

• 次にエタノールやアセトンで脱色します。グラム陰性菌は外膜の脂質が溶解し染料が流出して色が失われ、グラム陽性菌は厚いペプチドグリカン層が染料を保持したまま色が残ります。

4. 対色染料（サフラニンまたはフクシン）

• 最後にサフラニンやフクシンで対色染色を行い、脱色されたグラム陰性菌をピンクに染めます。これにより、グラム陽性菌は紫色、グラム陰性菌はピンク色として視覚的に区別できます。

この一連の手順により、顕微鏡下で細菌の形態と染色結果を観察し、迅速に分類が可能となります。