パラフィン埋め込みプロトコル

科学者は通常、生物学的サンプルを固めてそれらを分割する必要があります。これにより、科学者は生物学的サンプルに染料、抗体、プローブを追加しやすくなります。また、さまざまな細胞層のオーバーレイも減少します。科学者は、パラフィンが水と混ざっていないため、切断のためのハードマトリックスとしてパラフィンワックスを使用します。パラフィンは炭化水素の一種です。生物学的サンプルには水が含まれているため、科学者はますます濃縮されたエタノール浴を使用してサンプルを脱水しなければなりません。

1. キシレン

   • 科学者は、キシレンを使用してエタノールを除去します。その後、溶融パラフィンワックスを使用してキシレンを除去します。光顕微鏡の場合、パラフィン切片の厚さは通常5μmです。パラフィンワックスは、スライスを薄くするのに十分に難しくありません。科学者は、最初にキシレンを使用して、次にエタノールを使用して組織を再水和します。その後、彼らは汚染を避けるために蒸留水で生物学的サンプルをすすいだ。

   修正

   • パラフィン埋め込まれた組織は、通常、ホルムアルデヒドの市販バージョンである中性緩衝ホルマリンを使用して固定されています。これには、パラホルムアルデヒドとメタノールが含まれ、ホルムアルデヒドがギ酸に変換されるのを防ぎます。薄くスライスされた組織には、微視的な解剖学の研究である最適な組織学のために、室温で48時間の固定が必要です。そうでなければ、組織は硬化し、脆くなります。処理前に、組織は通常、摂氏4度の温度で70％のエタノールで保存されます。

   パラフィンプロセッサ

   • 科学者はしばしば、パラフィンプロセッサを使用して、熱いパラフィンが組織から入る前に、材料を徐々に脱水する風呂から組織を送ります。科学者は一晩プロセッサを実行します。プロセッサは、組織に依存する特定の長さの組織を加熱して、硬くも脆くなりません。プロセッサは、パラフィンの浸透を高速化し、気泡を除去する真空を使用します。処理されると、組織は室温でカセットに保管されます。

   ワックスの融解

   • パラフィンは、組織を追加する前に1時間溶けます。カセット全体を65度の摂氏パラフィンバスに15分間配置します。冷たいアルミニウムヒートシンクは、パラフィンワックスを20分間冷却します。ワックスが亀裂や組織が正しく揃っていない場合、科学者はパラフィンを溶かし、プロセスを繰り返します。

   切断

   • 組織を切断するとき、科学者は摂氏35〜37度に水浴を取得します。水は新鮮で脱イオン化されています。ブロックは、氷のブロックまたはヒートシンクの上に10分間下に置かれます。ブレードはブロックをセクションに切ります。発生する可能性のある2つの問題は、リボンの不十分な標本と断片化です。標本が断片化すると、水が熱すぎます。ブロックがリボンをうまくいかないかどうかは、再び開始する前にアイスブロックに戻し、ワックスを固定する必要があります。