NBTアッセイプロトコル

NBTまたはニトロブルーテトラゾリウムは、酵素アルカリホスファターゼを検出するために生化学と免疫学で使用される化合物です。この物質は、免疫性細胞に影響を与える慢性肉芽腫性疾患の診断検査でも使用されます。 NBTアッセイプロトコルには、免疫ブロッティング、BCIP/NBTアルカリホスファターゼ基質溶液、および組織におけるガラクトシダーゼおよびアルカリホスファターゼ活性の検出が含まれます。

1. 免疫ブロッティング

   • Immunoblottingは、RNAタンパク質相互作用プロトコル」でスーザンR.ヘインズによると、免疫焦点プロセスに関与するタンパク質である抗体を検出するために使用される技術です。これには、NBTの使用、ウシ血清アルブミン、一次抗体9E10、コマシー染色溶液、ニトロセルロース膜、トリス塩基緩衝液、硫酸塩あたりのアンモニウム、硫酸ナトリウム、水飽和ブタノール。

   BCIP/NBTアルカリホスファターゼ基質溶液

   • IHCワールドのWebサイトによると、技術者は1パーセント5-ブロモ-4-クロロ-3-インドリルリン酸（BCIP）、1.5パーセントNBTの3滴、化学物質レバミゾールとアルカリホスファターゼ（AP）バッファー（AP）バッファーを備えた溶液を準備します。その後、溶液は室温でインキュベートされ、使用可能になります。

   組織におけるガラクトシダーゼおよびアルカリホスファターゼ活性の検出

   • ガラクトシダーゼは、大腸菌や他の生物に存在するガラクトシド分子を破壊できる酵素です。このプロトコル中に、このプロトコル中に、生物学者はPBS溶液、グルタルアルデヒド、およびパラフォーマルディデで処理したラット細胞サンプルを使用します。次に、サンプルのブロモ - クロロ - インドリル - インドリル - インドリル - ガラクトピラノシドまたはX-gal反応緩衝液を調製し、フェロシアン化カリウム、塩化マグネシウム、デオキシコレートナトリウム、界面活性剤ノンアイデットP-40を使用します。技術者は、より速い代替手段として、フェロシアニドカリウムの代わりにニトロブルーテトラゾリウム（NBT）を使用できます。細胞サンプルは後に顕微鏡下で観察されます。