組換えプラスミドの伝播

一部の細菌や酵母種に見られるプラスミドは、細胞の主要染色体の外にあるDNAの比較的小さく、自己複製された輪です。他の種から選択された遺伝子を比較的簡単にプラスミドにスプライスし、同じまたは異なる種の宿主細胞間でそれらを移動し、それらを刺激して、通常よりもはるかに高く、または増幅されるようにそれらを刺激するか、または伝播するため、それらは遺伝子工学で非常に有用です。組換えプラスミドは、他の種の遺伝子を含むように設計されたものだけです。特に増幅された伝播により、組換えプラスミドは、大規模で工業規模でより迅速かつ容易に望ましいタンパク質を発現できます。

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必要なもの

• 既存のプラスミドおよび遺伝子ライブラリー、またはプラスミドと遺伝子は、宿主生物から分離し、一緒にスプライスした
• 細胞培養機器
• 塩化カルシウム、電気ショック、寒冷と熱、クロラムフェニコール、電気ショック、および/またはTaqポリメラーゼ酵素などの増幅剤

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手順

1. • 1

     特定の組換えプラスミドと宿主生物に最適な増幅手順または手順を選択してください。一部の手順は、他のプラスミドや宿主よりもうまく機能します。新しい、まだ経験豊富な組換えプラスミドを使用している場合、および/または異なる宿主種を試している場合、試行錯誤を通じて最良の増幅プロセスまたはプロセスを決定する必要がある場合があります。

   • 2

     特定のプラスミドと宿主の細胞種がそれに反応する可能性がある場合は、変換と呼ばれるプロセスを試してください。塩化カルシウム（CACL）溶液で、細胞とプラスミドをゼロ程度Cに冷やします。温度をすばやく上昇させて37〜43度Cになります。この急激な温度変化により、細胞膜がプラスミドの大量を占有します。

   • 3

     エレクトロポレーションが望ましい増幅法である場合、プラスミドと細胞の溶液を介して高電圧電気パルスを送信します。この技術は、プラスミドに対する細胞膜透過性を増加させます。

   • 4

     宿主細胞培養を低レベルの抗生物質クロラムフェニコールにさらして、細胞あたり最大100個のプラスミドを生成します。この方法は、宿主細胞の主な染色体の複製を抑制しながら、それにスプラックスした遺伝子を含むプラスミドの制御されていない複製を誘導します。

   • 5

     ポリメラーゼ連鎖反応またはPCR法を適用して、非常に高度にプラスミドコピーを生成します。 PCRは、遺伝的配列が本質的に形成される化学反応であるDNA重合に基づいています。 PCRは、ほとんどの場合、温泉に住む細菌種から抽出されたTaqポリメラーゼと呼ばれる熱安定酵素によって触媒されます。