果物表面の細菌を培養寒天で確認する方法

細菌は至る所に存在し、簡単に採取・培養できます。最も一般的な培養方法は、栄養寒天（アガー）を入れたペトリ皿を使用することです。アガーは微生物が増殖できる栄養素を含んでおり、培養したコロニーの数や形態を観察できます。

必要なもの

• 保護用手袋
• 果物（例：リンゴ、バナナなど）
• アガーを入れたペトリ皿（半分まで）
• バンゼンバーナー
• 接種ループ（または針）
• インキュベーター（37℃）
• 細菌同定表または参考書
• ガラススライド
• 蒸留水
• スライドラック
• プラスチック製容器（染色用）
• 結晶紫染色液
• エタノール（95%）
• 複合顕微鏡

手順

1. 保護手袋を装着し、接種ループと果物を用意します。

2. バンゼンバーナーの炎に接種ループをかざし、赤くなるまで加熱して既存の細菌を殺菌します。

3. ループを果物表面にこすり、すぐに新しいアガー入りペトリ皿にストリークします。ストリーク後、再度炎でループを加熱し、再度殺菌して皿の蓋を閉じます。

4. 同様の操作を別の2枚のアガー皿でも行い、計3枚の培養皿を作ります。結果の比較がしやすくなります。

5. 培養皿を37℃のインキュベーターに入れ、48時間培養します。

6. 培養後、皿上に形成されたコロニーの数・色・形状を観察し、細菌同定表や文献を参考にして種別を推測します。

7. 接種ループを再度炎で加熱し、コロニーの一部をガラススライドへ転写します。蒸留水を1滴加えて乾燥させ、再度炎で固定します。

8. スライドをプラスチック容器に置き、結晶紫染色液を滴下して1分間染色します。容器は染料の飛散を防ぎます。

9. 蒸留水で洗浄し、続いて95%エタノールで洗浄して薄い細胞壁の染色を除去し、再度蒸留水で洗い流します。

10. 複合顕微鏡でスライドを観察します。グラム陽性菌は濃い紫色（厚い細胞壁）、グラム陰性菌は薄い紫色（薄い細胞壁）に染まります。形態や数も併せて記録してください。