HPLCのテクニックと応用ガイド

四つの構成要素

HPLCは以下の四つの主要コンポーネントから成り立っています。

• ① 溶媒供給システム（移動相）：サンプルをカラム内に運ぶ液体で、極性が分離性能に大きく影響します。

• ② カラム（固定相）：通常はシリカゲルやアルミナなどの吸着剤が充填された垂直ガラス管です。

• ③ サンプル導入システム：注入口を介してサンプルを移動相に導入します。

• ④ 検出器：分離された成分を検出し、クロマトグラムとして記録します。

検出器

検出器は分析対象や目的に応じて選択します。選定基準は選択性、S/N比、検出限界、線形範囲、時間定数、ドリフト、セル体積などです。代表的な検出器には以下があります。

• 紫外可視検出器（UV‑Vis）

• 質量分析計（MS）

• 屈折率検出器（RI）

• 蛍光検出器（FLD）

• 蒸発光散乱検出器（ELSD）

操作手順

1. 検出器、ポンプ、データ取得用コンピュータを起動し、必要なプログラムを設定します。
2. サンプルを注入口に注入します。
3. カラムの最大許容圧力を超えないように圧力を監視します。
4. クロマトグラムを印刷または保存し、結果を解析します。
5. ラン終了後は注入口をフラッシュし、詰まり防止のために洗浄します。

主なタイプ

以下のようなHPLCモードがあります。

• 親水性相互作用クロマトグラフィー（HILIC）：極性固定相と非極性の水混合移動相で、酸性・塩基性・中性サンプルを一つのクロマトグラムで分離。

• 正相クロマトグラフィー：極性固定相と非極性・非水性移動相で構造異性体を分離。

• 逆相クロマトグラフィー：非極性固定相とやや極性の水性移動相を使用し、製薬業界で最も広く利用。

• サイズ排除クロマトグラフィー：分子サイズで分離し、タンパク質の構造解析にも利用。

• イオン交換クロマトグラフィー：固定相に結合した電荷部位と溶質イオンの相互作用で分離。

利用例

HPLCは医薬品の分析・純度確認、創薬研究、既存薬の精製に加え、生体液、農薬、爆薬、その他の化合物の分析にも使用されます。また、化粧品、食品、環境、エネルギー分野でも重要な分析手段です。