TMREプロトコル

Tetramethylrhodamine ethyl（TMRE）は、ImmunoChemistry Technologies社が提供する MitoPT™ TMRE/TMRM ミトコンドリア膜電位評価キットに使用される「ゆっくりと分配される脂溶性カチオン蛍光染料」です。この染料を用いることで、細胞内の膜貫通電位勾配を可視化できます。

アッセイの準備

• 手順はシンプルで、37℃で約20分で完了します。使用する生細胞は、数時間から数日かけて培養・準備します。コントロール細胞はアポトーシスを誘導する必要があるため、数時間の準備が必要です。

プロトコル パート 1

• アポトーシスまたは酸化ストレス誘導に適した細胞密度（10⁶細胞/mL を超えない）で培養します。

プロトコル パート 2

• 同時に、誘導しないネガティブコントロール細胞群を同じ密度で培養します。

プロトコル パート 3

• 選択した手法でアポトーシスを誘導するか、ミトコンドリアを意図的に脱分極させます。

プロトコル パート 4

• 1X アッセイ／洗浄バッファーを調製します。

プロトコル パート 5〜8

• 1 mM または 0.2 mM の MitoPT™ TMRE/TMRM ストック溶液を調製します。パート 6 では、1 mM を 1:100、または 0.2 mM を 1:20 に希釈し、細胞培養サンプルにスパイクします。
• パート 7 では、最終濃度 20〜200 nM の TMRE/TMRM 溶液で細胞を染色します。
• パート 8 では、取得したデータを解析します。