組織培養のヒント
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組織培養細胞
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一部の細胞はペトリ皿の底に接着するか、液体に懸濁したままです。細胞は植物または動物の起源である可能性があります。組織培養で使用される細胞は原発性細胞である可能性があります。つまり、生物から直接収穫された、または培養で維持されている細胞株のものです。細胞株はしばしば癌細胞であり、これは実験を計画または解釈するときに考慮する必要があります。
細胞を優しく処理します
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接着細胞は、擦り切れ、またはプロテアーゼ、一般的にトリプシンとEDTAを使用して、ペトリ皿から通過するために除去されます。スクレイピングは多くの細胞を殺し、細胞溶解物（分析のための細胞含有量の液体製剤）を調製する場合、またはトリプシン/EDTAを絶対に回避する必要がある場合にのみ使用する必要があります。
トリプシン化は、細胞を皿に付着させるタンパク質だけでなく、細胞の膜上の他のほとんどのタンパク質も除去します。セルはボールアップして、通常は一晩時間をかけて、皿との絆を再確立します。 25cm2フラスコに最小限のトリプシン（1ml）を追加すると、フラスコを5秒以内に揺らして単層をコーティングし、過剰なトリプシンを注ぎ込んだり吸い込んだりすると、単層が露出するトリプシンの量が減ります。トリプシン化中に細胞をインキュベーターで休ませます。
細胞が皿の底から滑り落ちた後、培地を血清で加え、溶解物をピペットを優しく上下に吸引します。塊を壊して均等なサスペンションを手に入れるために、数回上下にピペットをしているときに、小さなメディアを皿に残してください。
泡をピペットに吸わないでください。また、細胞懸濁液を激しく混合または渦巻かないでください。このボールアップ状態では、細胞は非常に脆弱です。
加熱するか、加熱しないか
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細胞培養技術が初期段階にある場合、胎児のウシ血清（FBS）は、細胞を溶解する免疫系タンパク質である補体タンパク質を含むことが知られていました。補体タンパク質は、細胞培養では望ましくありません。摂氏56度で30分間の熱不活性化FBSは、補体タンパク質を不活性にします。 FBSを37度Cから37度Cでも、補体タンパク質を不活性化するのに十分です。
初期には、熱不活性化FBSもマイコプラズマや他の汚染物質を殺しました。当時、0.45umフィルターでフィルターの滅菌を実行しました。今日、0.1umまたは0.04umフィルターを介してFBSとメディアを滅菌します。マイコプラズマはそれをすり抜けません。
これにより、不活性化を加熱するかどうかという疑問が残ります。
熱の不活性化は、FBSのすべての成分（ビタミン、アミノ酸、成長因子など）を分解して、いくつかの細かい細胞株の閾値を下回る可能性があります。
ゆっくりと成長している、または細かい細胞株を使用している場合は、FBSを滅菌するだけでフィルタリングすることを検討してください。これにより、セルの堅牢性が向上する可能性があります。
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