LB寒天培地プレートの作り方
概要
寒天は赤藻から抽出したゲル状の物質で、培地や培養に広く利用されます。LB寒天培地は、Lysogeny Broth（リゾゲニー ブロス）に栄養豊富な培地成分を加えたもので、細菌培養に最適です。発明者のジュゼッペ・ベルターニは、LB が「Luria‑Bertani」の略ではなく、あくまで「Lysogeny Broth」の頭文字であると明言しています。LB寒天培地はシンプルで汎用性が高く、家庭や研究室で手軽に作れます。
必要なもの（1 Lの培地を作る場合）
- はかりと計量紙またはトレイ
- 1 L メジャーシリンダー
- 蒸留水または脱イオン水 1 L
- 2 L イーレプラーネフラスコ
- トリプトン 10 g
- 酵母エキス 5 g
- 食塩（非ヨウ化） 5 g
- 寒天 15 g
- アルミホイル
- 耐熱オーブンミット
- オートクレーブまたは圧力鍋
- 滅菌済みペトリ皿
作り方
- 培地の体積の2倍程度の容量（2 L）を持つイーレプラーネフラスコに、トリプトン、酵母エキス、食塩を入れる。
- 蒸留水または脱イオン水を加え、軽くシェイクして乾燥成分をできるだけ溶かす。
- 寒天を加えてさらにシェイクする。完全に溶解しなくても構いませんが、底に大きな塊が残らないようにします。
- フラスコの口をアルミホイルで密閉する。
- フラスコをオートクレーブ対応の容器に入れ、容器に約1 cm の水を注ぐ。
- オートクレーブで液体サイクルを選び、最低20分間滅菌する。圧力鍋を使用する場合は次の手順へ。
- 圧力鍋を使用する場合は、鍋に少量の水を入れ、フラスコを水に沈める。1回に滅菌できる量は250 mL 以下に限ります。
- 約20 psi に加圧し、30分間滅菌する。
- 滅菌が終わったらフラスコを取り出し、やけどに注意しながら取り扱う。
- フラスコを軽く回転させ、寒天が均一になるように混ぜる。
- フラスコを平らな場所に置き、少し冷ます。1 L 以上作った場合は10〜20分ごとに軽く回転させる。指の背で2秒間触れて熱さを感じなければ、注ぎ始めて良い。
- ペトリ皿を平らな面に置き、蓋を斜めに持ち上げて皿の大部分を覆ったままにする。
- フラスコの培地を皿の半分程度の高さまで注ぐ。
- すぐに蓋を戻し、次の皿へと続ける。固まるまで約30分かかります。
- 使用しない場合は、元の滅菌バッグまたは別の滅菌容器に入れ、湿度を保つように密封する。保存温度は約4〜5 ℃（約39〜40 °F）です。