タンパク質の発現を測定する方法

タンパク質は細胞活性の最終触媒として機能するため、タンパク質発現測定は体内の遺伝子の活性に関する手がかりを提供できます。しかし、2010年3月号の「Labmedicine」の記事によると、病理学者と生物学者は、タンパク質発現を測定する最も適切な方法として、Brightfield Microscopyまたは蛍光顕微鏡にまだ同意していません。全面的なブライトフィールドスキャンは使いやすく、クロモゲンの安定性を提供するだけでなく、ガラススライドをより長く保護できます。

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必要なもの

• 細胞組織
• スライド
• ビオチン化二次抗体
• streptavidin-horseradishペルオキシダーゼ
• 3,3'-ジアミノベンジジン
• カラーラインスキャンカメラ

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手順

1. • 1

     細胞組織をスライドに置き、ビオチン化二次抗体を加え、続いてストレプトアビジン - ホルセラディッシュペルオキシダーゼが続き、2分間待ちます。

   • 2

     標本に3,3'-ジアミノベンジジンの4滴を注ぎ、茶色の染みが標本に完全に広がるまで2分間待ちます。

   • 3

     よく明るい部屋の電動プラットフォームに染色標本の組織学的部分を置きます。カラーラインスキャンカメラを20倍または40倍の倍率に慎重に調整し、標本をスキャンします。画像のストライプを調整し、デジタル画像を読み取り可能なファイルサイズに圧縮します。

   • 4

     手動分析のためにデジタル画像を印刷するか、テクノロジーを支援する分析のために画像をコンピューターソフトウェアに送ります。画像に示されているように、汚れのパターンを観察します。標本の汚れのパターンに基づいてタンパク質発現を慎重に分析します。

   • 5

     細胞組織に発現したタンパク質の濃度を調べることにより、癌細胞と間質のタンパク質発現を評価します。

   • 6

     色パターンを使用して、0〜3+のスケールでタンパク質発現を定量化します。スコアを使用して、彼女のスコアまたはAllredスコアを計算します。