タンパク質発現の測定方法
タンパク質発現の測定は、体内の遺伝子活動を把握する手がかりとなります。タンパク質は細胞の最終的な触媒として機能するためです。しかし、2010年3月号の『LabMedicine』によると、病理学者や生物学者の間では、明視野顕微鏡と蛍光顕微鏡のどちらが最適かについて合意が得られていません。全スライドの明視野スキャンは操作が簡単で染色体の安定性が高く、ガラススライドの保存期間も長くなるという利点があります。
必要なもの
- 細胞組織
- スライド
- ビオチン化二次抗体
- ストレプトアビジン‑ホースラディッシュペルオキシダーゼ
- 3,3'-ジアミノベンジジン
- カラ―ラインスキャンカメラ
手順
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細胞組織をスライドに載せ、ビオチン化二次抗体を加え、続いてストレプトアビジン‑ホースラディッシュペルオキシダーゼを加えて2分間インキュベートします。
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3,3'-ジアミノベンジジンを4滴滴下し、2分間放置して標本全体に茶色の染色が広がるのを待ちます。
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染色した標本の組織切片を明るい部屋のモーター駆動プラットフォームに置き、カラ―ラインスキャンカメラを20倍または40倍に設定して走査します。画像のストライプを整列させ、デジタル画像を適切なサイズに圧縮します。
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デジタル画像を印刷して手作業で解析するか、解析ソフトウェアに入力して自動解析を行います。画像上の染色パターンを観察し、標本の染色パターンに基づいてタンパク質発現を評価します。
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がん細胞と間質におけるタンパク質濃度を調べ、発現レベルを評価します。
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染色の色調を0〜3+のスケールで定量し、得られたスコアを用いてHERスコアまたはAllredスコアを算出します。