ELISA実験でのブロッキングバッファの使い方
ブロッキングバッファは、免疫化学アッセイにおいてコーティングされたプレート上のタンパク質を安定化させ、ノイズを低減し、感度・効率・保存期間を向上させ、再現性を高める役割を果たします。ELISA（酵素免疫測定法）では、抗原・抗体が結合した後に残る非特異的結合を防ぐために使用されます。ELISA の構成は多様なため、目的に合わせてさまざまなブロッキングバッファが選択できます。
必要なもの
- 抗体サンプル
- タンパク質サンプル
- アッセイプレート
- ブロッキングバッファ
- 実験用ビーカー
- ピペット
手順
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実施する ELISA のタイプに応じてブロッキングバッファを選択します。一般的なブロッカー（哺乳類タンパク質スキャフォールド）はサンドイッチ型や抗原ダウン型 ELISA に、BB2 Neptune（非哺乳類タンパク質スキャフォールド）はヒト・哺乳類種向け、BB3 Synblocks（小分子合成スキャフォールド）は高強度ブロッキングが必要な場合、BB4 Phosph‑Free（リンフリーの小分子スキャフォールド）は酵素標識コンジュゲートの非特異的結合が問題になる ELISA に適しています。
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抗原（タンパク質）または抗体溶液をプレート全体に均一に注ぎ、コートします。
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コート液をプレートを傾けて余分な液を別容器に除去し、吸引します。
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各ウェルに 300〜400 µL のブロッキングバッファをピペットで加えます。
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室温または 4℃ で約 3 時間、もしくは一晩インキュベートします。適切なブロッキングバッファは高価な試薬の保存に寄与し、供給不足リスクを低減します。
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余分なタンパク質やバッファを洗浄し、除去します。これにより目的抗原の検出感度が向上します。
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反応が完了したら、抗体が抗原に結合したプレートが得られます。これにより結果の一貫性が保たれ、大規模比較試験でのプレート間変動が抑えられます。
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マイクロアレイを使用する場合は、Array It’s Block‑It Buffer のような高度ブロッキング溶液を用います。印刷後に残る反応性基を完全に不活性化し、信号の鮮明さと蛍光ノイズ低減を実現します。正しく保存すれば保存期間は約 1 年で、濃縮液としてすぐに使用可能です。