バッファをブロックする方法

ブロックバッファーは、免疫化学アッセイのコーティングされたタンパク質を安定化するために使用され、免疫化学技術によれば、個々のアッセイの結果のノイズを減らし、アッセイの感度を高め、コーティングされたプレートの効率と貯蓄寿命を高め、再現性を高めます。ブロックバッファーは、タンパク質と抗体が結合し、ELISA（酵素結合免疫吸着剤アッセイ）中にコーティングされたアッセイプレートに吸収された後、非特異的結合を阻害します。 ELISAはさまざまな方法で構築できるため、技術者の個々の要件を満たすためにバッファをブロックするいくつかの選択肢があります。

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必要なもの

• 抗体サンプル
• タンパク質サンプル
• アッセイプレート
• ブロッキングバッファー
• 実験室ビーカー
• ピペット

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手順

1. • 1

     実行するELISAの種類に応じて、ブロッキングバッファーを選択します。バッファーの選択には、サンドイッチおよび抗原ダウンELISAの一般的なブロッカー（哺乳類タンパク質足場）が含まれます。ヒトおよび哺乳類の種ELISAのBB2ネプチューンブロッキング（非哺乳類タンパク質足場）。高強度ブロッキングELISAのためのBB3シンクロック（小さな合成分子足場）。およびBB4の濃い酵素標識コンジュゲート結合ELISAのためのBB4フリー（小、合成、蛍光、リンを含まない分子足場）。 BB4バッファーブロッカーは、アルカリホスファターゼ、化学処理またはガラス反応プレートを使用するアッセイおよびマイクロ流体で特に有用です。

   • 2

     プレートに溶液を注ぐことにより、アッセイプレートに抗原（タンパク質）または抗体を塗ります。

   • 3

     吸引（除去）プレートをチップして、余分なものが別の容器に廃棄されるように。

   • 4

     ピペットを使用して、ピペット300〜400マイクロリットルのブロッキングバッファーをアッセイプレートの各ウェルに入れます。

   • 5

     溶液を約3時間または周囲温度（摂氏4度）で一晩インキュベートします。 Cell Technology Companyによると、適切なブロックバッファーは試薬を節約します。これは、費用がかかり、不足している可能性があるため価値があります。

   • 6

     過剰なタンパク質を洗浄して、Pierce Netによって報告されているように、標的抗原の検出を減らす可能性があるため、過剰な量を除去します。

   • 7

     この時点で、反応が完了し、抗原に結合した適切な量の抗体を含む完成したプレートが必要です。

   • 8

     マイクロアレイの場合、アレイIT's Block ITバッファーなどの高度なブロッキングソリューションを使用します。これは、スーパーエポキシ、スーパーアミン、スーパーアルデヒドを含むスライド上の基板の「印刷」に続いて、結果のシグナル、蛍光騒音を予防し、燃え上がった騒音を予防します。この試薬は、正しく保管されていれば1年の保存期間があり、非常に純粋で、すぐに使用できる濃縮物として提供されます。