ゲル電気泳動のトラブルシューティング

ポリアクリルアミドゲル電気泳動、またはPageは、生物学的サンプルの有機分子の分離に一般的に使用される手法です。電流を塗布すると、サイズが低く、体重が少ない分子はポリアクリルアミドゲルでより速く移動します。完成したゲルが特定の染色でインキュベートされた後、透明な異なるバンドが一般に観察されます。比較的簡単な方法です。ただし、塗りつぶしたり汚れたりするバンドやバンドの欠如は、メソッドの1つ以上のステップで問題を示す可能性があります。基本的なガイドラインに従って、結果が予想されていない場合は、ゲル電気泳動法のトラブルシューティングを行う必要があります。

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必要なもの

• 品質グレードのビス：アクリルアミドまたはプレキャストプレート
• 2つのガラス板
• アクリルアミド：bis
• tbe buffer（tris、bor酸、edta）
• 電源
• 上部バッファーチャンバー
• 下部バッファチャンバー
• DNAサンプルのタンパク質
• temed
• persulfate酸アンモニウム
• ゲル染色

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手順

1. • 1

     最初にゲル電気泳動の最終ステップから始めて、後方に動作します。ゲル電気泳動の場合、最後のステップは、サンプルバンドを観察するために使用される染色手順です。染色手順中に実際に実際に発生するはずの問題はほとんどありません。ただし、粉末状の汚れは、ゲルを染色するために使用する前に、適切な緩衝液によく溶解する必要があります。染色の正しい濃度が使用されたことを確認しました。

   • 2

     電源を確認してください。バンドの欠如は、電流または電圧の設定が高すぎて、テストサンプルがゲルから移動したことを示している可能性があります。また、高い設定では、サンプルコンポーネントがゲルを介して移動しすぎて、解像度が不十分で、バンドが汚れているように見えます。電源設定が低い場合、サンプルはゲルを介して移動しない場合があります。サンプルは、荷重がかかっている井戸から漂流し、ゲルを通って移動しない可能性があります。

   • 3

     ポリアクリルアミドゲルを鋳造するために使用される液体アクリルアミドを確認してください。通常、ポリアクリルアミドゲルの鋳造に使用されるアクリルアミドの割合は5〜15％です。大きな分子で構成されるサンプルは、5％のゲルにロードされます。これは、大きな断片がより高いアクリルアミドの割合でゲル上でゆっくりと移動するためです。低いゲル濃度が小さなサンプルを分解できないため、小分子はより高いパーセントゲルにロードされます。

   • 4

     アクリルアミドを重合するために使用される試薬を確認してください。ポリアクリルアミドゲルは、ビサクリルアミドとアクリルアミドからなる液体混合物の重合によって形成されます。硫酸アンモニウムと測定されたアンモニウムをアクリルアミドに加えて、ゲル形成を触媒します。通常、アクリルアミドは、過硫酸アンモニウムと温度が追加されてから15分後に重合（ゲル形成）の兆候を示すはずです。速すぎる重合は、多硫酸アンモニウムの結果です。硫酸アンモニウムが少なすぎると、不完全または不均一な重合を引き起こす可能性があります。

   • 5

     ロードされたサンプルの量を確認します。高濃度のサンプルは、ゲルを介してゆっくりと移動し、バンドの解像度を減らすことができます。低いサンプル濃度は、ゲルが染色された後に観察されない場合があります。これらの汚れには、染色感度の結果として画像化できる最小のサンプル量に関して制限があります。

   • 6

     ロードされたサンプルの品質を確認します。サンプルに存在する塩やその他の汚染物質は、ゲルに沿ったサンプルの動きに影響を与える可能性があります。電気泳動は、電流伝導バッファーを含むゲルを通る電流の結果です。サンプル内の高塩濃度は、ゲルを介してこの電流の動きに影響を与える可能性があります。サンプルの分離は、比較的純粋なサンプルを生成する精製キットを組み込む必要があります。

   • 7

     文献または書面によるプロトコルをレビューして、実験を実施するために適切なページを使用したかどうかを判断します。ページ内のアクリルアミドの割合は、テストするサンプルのサイズに固有です。文献は、サンプル移動の電源と速度のセットアップに関する特定の情報を提供することもできます。