ウエスタンブロットプロトコル

ウエスタンブロットは、毎日医療分野、生物学ラボ、その他の科学分野で使用されるタンパク質ブロットの一種です。ウエスタンブロットは、適切に実行されると、組織サンプルでタンパク質発現を研究する方法です。 各サンプルのパラメーターに違いがある可能性があるため、正確な結果を得るために従うべきプロトコルが多数あります。

1. 洗浄の実行

   • 抗体溶液の膜を適切な時間のためにインキュベートした後、これは抗体溶液の使用によって異なるため、Encor Biotechnologyは、膜がTBSで3つの室温洗浄を受けるべきであると述べています。 TBSは、洗浄用の特定のメイクとpHを備えたソリューションです。膜は、新しい抗体溶液の導入ごとに洗浄する必要があります。

   染色混合物の準備

   • WesternBlotting.orgによると、メンバーに適用する直前に染色混合物を準備すると、最良の結果が得られます。染色溶液には複数のタイプがあり、その一部は購入でき、その一部はラボで混合する必要があります。 Encor Biotechnologyによると、化学発光染色は、染色ごとに最も多くの情報を提供しますが、最も高価であり、開発には暗室が必要です。馬の大根ペルオキシダーゼ染色とアルカリ性ホスファターゼの吸収剤は、染色の他の選択肢です。どの方法が使用されているかに関係なく、使用の直前に混合物を準備することが不可欠です。

   バッファーの使用

   • 選択した染色溶液を適用した後、バッファーの使用が重要です。化学発光染色では、westernblotting.orgによると、染色溶液の上部にアセテートを塗布するのはプロトコルです。馬の大根ペルオキシダーゼ染色では、茶色の染色生成物を得るために酢酸アンモニウム緩衝液を使用する必要があります。紫色の染色生成物を作成するはずのアルカリホスファターゼの吸収剤で使用される緩衝液は、作るのがより複雑で、すでに購入できます。