接着細胞培養プロトコル

培養細胞は、血液細胞のように懸濁培養するものと、繊維芽細胞のように表面に付着して増殖するものに大別されます。細胞種や実験目的に応じて、培養面は細胞外マトリックスでコーティングする必要があります。すべての細胞培養は無菌状態で行うことが前提です。

最適な培養環境

ほとんどの細胞は、Dulbecco改良Eagle培地（DMEM）またはRoswell Park Memorial Institute培地（RPMI）に、10％胎牛血清、2 mMのグルタミン、抗生物質（例：100 Uのペニシリンと0.1 mg/mlのストレプトマイシン）を加えて培養できます。培養は、37℃、5％CO₂、加湿されたインキュベーターで行います。

継代（パッシング）

培養フラスコは毎日、感染、死滅、増殖状態を確認します。細胞が約80％コンフルエントになったら、細胞の健康と対数増殖期を保つために継代します。培地を除去し、PBSで洗浄した後、トリプシン/EDTA溶液を加えて細胞接着タンパク質を分解させます。軽く揺すって細胞を剥がし、培地でトリプシン/EDTAを中和します。

継代培養

トリプシン/EDTA処理後の細胞懸濁液は遠心分離し、ペレットを洗浄します。その後、培地に再懸濁し、適切な濃度に希釈して新しいフラスコに播種します。継代ごとにパッセージ番号が1つ増えます。

培地の交換

培地は週に2回、古い培地を除去し、温めた新しい培地に交換します。