接着細胞プロトコル

培養中の細胞は、血球などの懸濁液で培養された形態、またはそれらが付着できる表面を必要とする線維芽細胞などの細胞のいずれかです。一部の表面では、細胞の種類と研究に応じて、異なる細胞外マトリックスでコーティングが必要になる場合があります。すべての細胞培養は実行する必要があります。

1. 最適な環境

   • 細胞タイプの大部分は、ダルベッコの改造されたイーグル媒体（DMEM）またはロズウェルパーク記念研究所（RPMI）で培養できます。たとえば、アミノ酸グルタミンおよび抗生物質の2つのミリモール、たとえば100単位のペニシリンおよび0.1ミリグラムのミリリターストレプタマイシンを追加します。細胞は、摂氏37度および5％の二酸化炭素の加湿インキュベーターで培地で維持されています。

   分割

   • 細胞は、感染、死亡、または成長を毎日チェックする必要があります。組織培養フラスコが細胞で80％コーティングされると、細胞の健康と成長の対数段階を維持するために細胞を分割する必要があります。培地は除去され、細胞はリン酸緩衝生理食塩水で洗浄されます。接着細胞は、細胞接着タンパク質を除去するためにトリプシンとエチレンジアミン膜酢酸（EDTA）の添加を必要とします。穏やかな動揺は細胞を除去する必要があります。トリプシン/EDTAソリューションを中和するためにメディアを追加する必要があります。

   サブカルチャー

   • 希釈した細胞とトリセピン/EDTA溶液は、ペレットと洗浄に遠心分離できます。セルは媒体に再懸濁し、希釈して新しいフラスコに複製できます。セルが分割されるたびに、セルの通過数は1つ増加します。

   メディアの変更

   • メディアは、古いメディアを削除し、新しい温かいメディアに置き換えることにより、週に2回変更する必要があります。