セルベースのELISAプロトコル

ELISA、または酵素結合免疫吸着アッセイは、特定のタンパク質の量を定量化するための医学および生物学的研究の診断ツールとして使用されます。 ELISAは抗体を使用して、目的のタンパク質と色を生成する試薬を検出します。色の量は、タンパク質の量に関連しています。

1. 細胞培養

   • 細胞は、100個のマイクロリットルの成長媒体を備えた96ウェルプレートの井戸に配置する必要があり、細胞は一晩沈殿するために残っています。因子に対する細胞の反応を研究している場合、細胞は24時間血清星を編成し、研究中の因子で刺激する必要があります。

   固定と原発抗体

   • 培地を除去した後、細胞は3％のホルムアルデヒドやメタノールなどの固定剤で処理されます。抗体が細胞に浸透するように、細胞膜を透過化する必要があります。メタノールが以前に使用されていない場合、0.1％のトリトンを使用することにより、透過化を達成できます。非特異的結合は、リン酸緩衝生理食塩水で希釈された10％の胎児子牛血清を使用することで防止できます。ブロックを除去した後、一次抗体を適用して1時間インキュベートできます。

   二次抗体と染色

   • 一次抗体を除去し、3回洗浄します。西洋ワサビペルオキシダーゼなどの検出剤にリンクした二次抗体を追加します。 1時間インキュベートします。洗浄。化学発光基質溶液を追加します。色の強度のためにプレートを開発してスキャンします。