細胞ベースELISAプロトコル

酵素免疫測定法（ELISA）は、臨床診断や生物学研究において、特定タンパク質を定量する基礎的手法です。抗体の特異性と発色または化学発光の検出を組み合わせ、タンパク質の量を測定可能なシグナルに変換します。

1. 細胞培養

   96ウェルプレートの各ウェルに、ウェルあたり100 µLの培地が入る濃度で細胞を播種します。夜間培養して細胞を付着させます。外部刺激に対する細胞応答を調べる場合は、目的の因子を加える24時間前に血清を除去して飢餓状態にします。

2. 固定と一次抗体処理

   培地を除去し、細胞を3 %ホルムアルデヒドまたはメタノールで固定します。メタノール固定でない場合は、0.1 % Triton X‑100で膜を透過化し、抗体のアクセスを可能にします。その後、PBS中に10 %胎牛血清を加えて非特異的結合部位をブロックします。ブロック後、一次抗体を加えて室温で60分インキュベートします。

3. 二次抗体と検出

   PBSで細胞を3回洗浄し、HRP（ホースラディッシュペルオキシダーゼ）結合二次抗体を添加します。60分インキュベートした後、再度洗浄し、化学発光基質を加えます。プレートリーダーまたはイメージングシステムで発光を測定し、タンパク質レベルを定量します。