寒天培地プレートの作り方
分子生物学や細菌学の実験では、寒天培地（アガー）プレートを用いて細菌などの微生物を培養します。寒天は液体の栄養培地を固め、微生物が増殖できる固体表面を提供します。培養した細菌はコロニーやスミアとして観察でき、後の解析に利用します。本稿では、実験室レベルの試薬や機器を使用した、衛生的かつ安全な寒天プレートの作成手順を紹介します。
必要なもの
- 手袋
- 実験用コート
- フェイスマスク
- バンセンバーナー（または滅菌された層流クリーンベンチ）
- 層流クリーンベンチ（推奨）
- 滅菌ペトリ皿
- バクトトリプトン 10 g
- 酵母エキス 5 g
- 寒天 15 g（アガロース）
- 1 M NaOH 1 mL（1 N NaOH）
- 滅菌蒸留水
- ガラス瓶（容量 1.5 L 以上）
- オートクレーブ用テープ
- オートクレーブ
- 必要に応じた添加剤（例：アンピシリン等の抗生物質）
手順
手袋、実験用コート、フェイスマスクを着用し、作業台を消毒します。バンセンバーナーの炎または層流クリーンベンチ内で作業し、空気中の汚染物質が寒天に入らないようにします。
ペトリ皿の包装を開封し、外側（フタではなく本体）に培地の種類と調製日をラベル付けします。フタを外し、皿を1層に並べておくと注入が楽になります。
バクトトリプトン、酵母エキス、寒天を混合し、NaOH溶液を加えて撹拌します。滅菌蒸留水で総量を1 L に調整し、1.5 L 以上のガラス瓶に移します。瓶のフタは緩めに締め、調製日と培地名を記入し、オートクレーブテープを貼ります。オートクレーブで25分間滅菌します。
滅菌後、瓶を45〜50 ℃に冷却します（この温度以下になると寒天が固まり始め、上部に注げなくなるため）。必要に応じて、温度が適切（≈48 ℃）であることを確認した上で、抗生物質などの添加剤を加えます。熱に弱い添加剤は、冷却が不十分だと失活しますので注意してください。
温かく液体状の寒天培地をペトリ皿の底部まで約半分の量（約15 mL）注ぎます。皿全体が均一に覆われるようにし、皿の縁まで溢れないようにします。注入中はバンセンバーナーまたはクリーンベンチの風を継続して、無菌状態を保ちます。
皿を室温で数分間固めた後、37 ℃以下の乾燥箱または温度調節可能なインキュベーターで30分〜1時間乾燥させます。代替として、層流ベンチ内で数分放置する、または風通しの少ない清潔なベンチで1〜2日置く方法もあります。乾燥させることで、後で添加する菌液が寒天表面に拡散せず、しっかりコロニーを形成できます。
乾燥が完了した寒天プレートは暗所で4 ℃に保管します。ラベルが見えるように皿を底面（開いた側）が上になるように積み重ね、微生物やほこりが表面に付着しないようにします。包装に戻し、アルミホイルで覆い、テープで封をします。内容と調製日を記入したラベルを貼り、最大2か月保存可能です。期限を過ぎた場合は廃棄してください。