寒天プレートを準備する方法

分子生物学と細菌学は、寒天プレートを使用して、実験のために細菌などの微生物を培養します。寒天は、微生物が生き残り成長させるために必要な液体栄養媒体を固める、またはゲルを固める薬剤です。寒天板に移動すると、細菌は異なるコロニー（低濃度で成長した場合）または塗抹標本（高濃度で成長した場合）に成長し、分析のために収穫することができます。生物学者は寒天プレートを準備します。これは、このプロセスでは実験室グレードの試薬と機械へのアクセス、および分子生物学と滅菌技術の十分な理解が必要です。

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必要なもの

• グローブ
• lab coat
• フェイスマスク
• bunsenバーナー
• ラミナーフローフード
• 滅菌ペトリ皿
• 10g bacto-tryptone
• 5g酵母抽出物
• 15gアガロース
• 1ml 1n naoh
• 滅菌蒸留水
• ガラス瓶
• オートクレーブテープ
• autoclave
• サプリメント、例えばアンピシリンなどの抗生物質

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手順

1. • 1

     手袋、グローブコート、フェイスマスクなどの適切な保護装置を装着し、すべての表面を除染します。 Bunsenバーナーの隣で、またはできれば滅菌ラミナーフローフードで作業します。これにより、空中汚染物質が寒天に落ちるのを防ぎます。

   • 2

     ペトリ皿のスタックをパッケージから取り外しますが、寒天プレートの再パッキングのために保存します。皿の外面（蓋ではなく）に寒天のタイプと準備日にラベルを付けます。寒さの注ぎを簡単にするために、蓋を取り外した単一層としてプレートを置きます。

   • 3

     Bacto-Tryptone、酵母抽出物、アガロースを混ぜてから、水酸化ナトリウム（NaOH）溶液を加えます。滅菌蒸留水を加えて、1Lの栄養媒体を取得します。この溶液を少なくとも1.5Lのボリュームでガラス瓶に移します。ボトルの蓋にゆるくねじ込み、準備日とメディアの名前にラベルを付けます。ボトルにオートクレーブテープのストリップを置き、25分間オートクレーします。ボトルを45度以下の摂氏に冷まします（または、時期尚早に硬化します）が、摂氏50度以下。 摂氏4度で冷却および固化した寒天のボトルを保管し、液化するまで暖かく保管できます。特定の実験または細菌の株に必要な場合は、抗生物質などの適切なタイプと量のサプリメントを追加します。メディアが熱すぎる場合、サプリメントは破壊されるので、進む前にメディアの温度を注意深く確認してください。

   • 4

     寒さがまだ暖かく液化されている間に、皿に半分充填するのに十分な量の寒天を注ぎます。表面積が完全に覆われていることを確認してください。過剰な量を注ぎ、寒天に皿の上部に到達させないでください。 Bunsen BurnerまたはLaminar Flowフードが継続的に動作できるようにすることにより、プレートを滅菌雰囲気に保ちます。プレートを設定してから蓋を交換してください。

   • 5

     摂氏37度以下のオーブンセットで、寒天プレートを約30分から1時間乾燥させます。あるいは、それらを3分間、層流のフローフードに、または1〜2日間は層状ではない交通量の少ないエリアにある除染された実験室ベンチに置いておくことができます。プレートを乾燥させると、寒天に固執するコロニーを形成するのではなく、寒天表面に置かれた細菌溶液が単に希釈して滑り落ちます。

   • 6

     プレートを暗闇と摂氏4度で慎重に保管してください。乾燥した寒天プレートを底を上げて積み重ねて、ラベルをはっきりと見て、微生物や破片が寒天表面に落ちて汚染するのを防ぎます。皿をパッケージに戻し、アルミホイルで覆い、パッケージを閉じてテープで留めます。詰め込まれたプレートに内容と準備日にラベルを付けます。プレートを最大2か月間保管して、その後それらを破棄する必要があります。