グラム陽性菌の同定手順と特徴

スライドスメアの作成

• 培養した細菌を接種ループや木棒で少量採取し、ガラススライドに薄く広げます。その後、自然乾燥させるか、低温の炎で素早く乾かします。

結晶紫染色の適用

• 乾いたスライドに結晶紫（濃い紫色）を滴下し、約1分間染色します。余分な染料は水またはアルコールで洗い流します。次にヨウ素液を加えてモルダント（染料を細菌に固定させる）として作用させます。

サフラニンでのカウンターステイン

• ヨウ素処理後、再度洗浄し、ピンク色のサフラニンでカウンターステインします。紙タオルで軽く拭き取り、スライドを乾燥させます。

顕微鏡での観察

• 顕微鏡下で観察すると、グラム陽性菌は結晶紫が残るため濃い紫色（または茶色）に見えます。これは細胞壁にペプチドグリカンが豊富に存在し、染料が保持されるためです。対照的にグラム陰性菌はサフラニンのピンク色が現れます。
• グラム陰性菌も少量のペプチドグリカンを持ちますが、外膜が染料の浸透を防ぐため色が変わります。

グラム染色後の追加鑑別

• グラム染色で陽性と判定された菌は、形態・構造・運動性・遺伝子解析などの追加検査でさらに細分化します。代表的な4つの科は以下の通りです。

バシラ科（Bacillaceae）

• 棒状（桿菌）で、運動性があるものは全体に鞭毛を持ちます。

ミクロコッカス科（Micrococcaceae）

• 球状で非運動性。二分裂後に四つずつの四連体（テトラド）を形成します。

マイコバクテリ科（Mycobacteriaceae）

• やや曲がった棒状。分裂時に枝分かれしたり、長い網目状の構造を作ります。

ペプトコッカス科（Peptococcaceae）

• 球状で嫌気性が多く、塩分に弱い種もあります。

各科内でも多様性があり、さらに詳細な生化学的・分子的検査が必要です。