放射線ハイブリッドの定義
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放射ハイブリッドマッピング
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放射線ハイブリッドマッピングは、哺乳類の染色体の長距離マップを構築し、互いに遺伝子マーカーの位置を発見するために元々開発された遺伝子工学プロセスです。放射線ハイブリッドマッピングは、デオキシリボ核酸(DNA)マーカーと染色体の順序を測定する統計モデルに根ざしています。 DNAマーカーは非常に短いです。環状DNA配列はゲノム内に含まれています。放射線ハイブリッドマッピングは、ゲノム内のヒト疾患遺伝子を局在化するために不可欠であることが証明されています。これらのDNAマーカーの相対的な位置は、遺伝子マップとして知られる物理マップに合体することができます。
放射線ハイブリッド技術のステップ
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放射線ハイブリッド技術の最初のステップには、シーケンスプロジェクトの最初のステップと同様のDNAの増幅と精製が含まれます。その後、放射線を使用してDNAをより小さなセグメントに分割し、これらのセグメントはハイブリッドセルに組み込まれます。その後、放射線ハイブリッド細胞を栽培して大量に増殖させます。ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)およびリンケージ分析を使用して、DNAマーカー間の距離を解決します。さまざまな遺伝マーカーの存在を簡単に確認できます。 2つの遺伝マーカーが互いに近いほど、DNA分割放射によって分離される可能性は少なくなります。
手順/手法
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放射線ハイブリッド技術の手順には、有毒な培地で生存できない2つの異なる細胞株の使用が含まれます。しかし、それらは、単一の細胞に結合すると毒性媒体に抵抗できる遺伝子を含んでいます(毒素耐性酵素の産生による)。研究中の細胞株は(通常はX線によって)照射され、DNAの破損を引き起こします。これにより、染色体がいくつかのセグメントに分割され、その後他の細胞株と融合または統合され、ハイブリッドが生成されます。ハイブリッドは両方の細胞株から遺伝子を組み込んでおり、必要な酵素を生成できるため、有毒培地で生存します。
栽培
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生き残ることができるハイブリッドセルは現在、大量に栽培されています。これは、照射された細胞株から遺伝するDNAを増幅します。次に、得られたサンプルをPCRにかけ、2つの特定の遺伝マーカーを増幅します。 PCR製品をゲルで実行することにより、両方のマーカーが得られた細胞株に組み込まれているかどうかを確認できます。各クローン(培養サンプル)でDNAマーカーが保持される周波数は、統計的方法を使用して計算できます。
アプリケーション
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ヒト、ラット、マウス、その他のゲノムなどの複数の種の染色体の生成されたマップは、多因子疾患の研究に使用される非常に詳細かつ正確なマップの生成を促進します。その他の用途には、26のヒト新規フルレングスcDNA(染色体DNA)の染色体位置の決定が含まれます。
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