灌流技術の概要と手順
灌流技術は、組織内のすべての細胞に対し迅速かつ均一な固定を行います。4%パラホルムアルデヒド固定液を血管系を通して流し、目的の組織を固定します。この手法により、特定の臓器における薬剤投与の主要な標的部位を特定できます。また、灌流はヒト脳の構造的・機能的組織構成の解明にも貢献しています。
必要なもの
- 動物（ラットまたはサル）
- 灌流ポンプ、ビーカー
- 固定液（4%パラホルムアルデヒド）
- シリンジ・針
- 灌流ドリップセット
- はさみ
- メス
- 鉗子
- 0.9%生理食塩水
- 氷箱
手順
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新鮮な4%パラホルムアルデヒドを作ります。パラホルムアルデヒド40gを水800mlに溶解し、攪拌しながら60℃に加熱します。その後、4℃まで冷却します。pHメーターでpHを9.5に調整し、必要に応じて無水酢酸で調整します。
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灌流ポンプを組み立て、ガラス部品と灌流針を取り付けます。チューブ内を100mlの水で流し、残留物を除去します。固定液のビーカーを氷箱に入れて冷却しておきます。
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灌流チューブの端を開き、固定液ビーカーに差し込みます。動物のサイズに応じて液量を調整し、ポンプのバルブをゆっくりとした一定の滴下に設定します。バルブを閉じ、灌流装置に0.9%（重量/体積）の生理食塩水を充填します。
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手術器具を手術台の近くに配置します。体重に合わせて麻酔（ケタミン0.5 mg/kg）を注射し、動物を背面を下にして手術台に固定します。
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メスで横隔膜を長さ方向に切開し、大はさみ（刃は鈍い側を下に）で横隔膜底部の結合組織を切ります。心臓を露出させ、鉗子で鼓動している心臓を保持し、左心室に針を挿入します。
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灌流ポンプのバルブを開き、0.9%生理食塩水を流します。液が自由に流れ、動物が生存していること、心臓が継続的に鼓動していることを確認します。血液が食塩水に置き換わったら、溶液を4%パラホルムアルデヒドに切り替えます。
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灌流を停止し、目的の組織を解剖します。組織は同じ培地に入れ、4℃で保存します。