灌流技術

灌流技術は、組織に存在するすべての個々の細胞に迅速かつ均一な固定を提供します。 4％のパラホルムアルデヒド固定剤が血管系を介して通過して、目的の組織を得ます。特定の臓器における薬物投与の主なターゲットサイトは、この手法の助けを借りて識別できます。灌流はまた、科学者が人間の脳の構造的および機能的組織を理解するのに役立ちました。

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必要なもの

• 動物（ラットまたはモンキー）
• 灌流ポンプ、ビーカー
• 固定（4％のパラホルムアルデヒド）
• シリンジ針
• 灌流ドリップセット
• はさみ
• scalpel
• 鉗子
• 0.9％生理食塩水
• アイスボックス

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手順

1. • 1

     40 gのパラホルムアルデヒドを800 mLの水に混合して、新鮮な4％のパラホルムアルデヒドを準備します。攪拌しながら溶液を60 Cに加熱します。ソリューションを4 Cを冷却します。PHメーターを使用して、pHを9.5に調整します。 pHを調整するには、氷河酢酸を追加して、目的のpHを取得します。

   • 2

     灌流ポンプをセットアップします。すべてのガラス部品と灌流針を取り付けます。灌流ポンプのチューブを通って100 mLの水道水を走らせて、ガラス部品から残留物を除去します。アイスボックスに固定剤のビーカーを置きます。

   • 3

     灌流チューブの端を開き、固定ビーカーに入れます。動物のサイズに応じて溶液の体積をスケーリングします。ここで、灌流ポンプバルブをゆっくりと安定した滴りに調整します。バルブを閉じます。灌流装置に0.9％（体重/体積）生理食塩水を埋めます。

   • 4

     手術器具を手術台の近くに設置します。体重（ケタミン0.5 mg/kg）に応じて動物に麻酔注射をします。動物を手術台に置きます。

   • 5

     横隔膜の長さに沿って、メスでカットします。大きなハサミ、鈍い側面を下にして、ダイアフラムの底に結合組織を切ります。心を露出させます。鼓動を鉗子で抱きしめ、左心室に針を挿入します。

   • 6

     灌流ポンプのバルブを開いて、0.9％の生理食塩水溶液の流れを可能にします。解決策が自由に流れ、動物が生きていることを確認してください。動物の心臓は絶えず鼓動しているはずです。血液が生理食塩水溶液に置き換えたら、溶液を4％のパラホルムアルデヒドに変更します。

   • 7

     灌流を停止し、関心のある組織を分析します。 4 c。

     で同じ培地に組織を保ちます