Safranin O染色プロトコル

Safranin Oは、分子生物学で広く用いられる染色剤です。軟骨（耳・鼻・関節を構成）や細菌の芽胞、肥満細胞顆粒、粘液タンパク質（ムシン）などと特異的に結合し、色彩を付与します。

軟骨染色プロトコル

本プロトコルは、軟骨、ムシン、肥満細胞顆粒（ヘパリン・ヒスタミンを含む）を検出するためのものです。標本はホルマリン固定後、パラフィン包埋し、水でハイドレーションします。

1. Weigert鉄血色素ヘマトキシリンで核を染色し、流水で洗い流す。
2. Fast Greenで細胞質を染色し、酢酸で軽くリンスする。
3. 0.1% Safranin O溶液を加え、5分間染色する。
4. エタノールで脱水し、透明化する。

顕微鏡観察では、核が黒、細胞質が灰緑色、軟骨・ムシン・顆粒がオレンジから赤色に呈色します。

芽胞染色プロトコル

芽胞は細菌がストレス下で形成する休眠構造で、Safranin Oはマラカイトグリーンと組み合わせて染色します。手順は以下の通りです。

1. 標本をスライド上で熱固定する。
2. マラカイトグリーン染色液を加え、加熱しながら染色する（芽胞が緑色に染まる）。
3. 流水で染色液を除去し、アルコール溶媒中のSafranin Oで再染色する（芽胞は緑、菌体は茶色がかりんご色またはピンク）。
4. 水で洗浄し、観察する。

脱灰顆粒（Condyle）染色プロトコル

関節や顆粒の脱灰部位を評価するための手順です。Safranin O水溶液で軟骨とカルシウム欠乏領域を染色します。

1. ラビットの顆粒スライドを40分間Safranin Oで染色する。
2. 蒸留水で3回洗浄する。
3. アルコール中のFast Greenで30秒間速く染色し、酢酸で短時間リンスする。
4. 水で洗い、エタノールで脱水する。
5. 最後にキシレンで透明化し、顕微鏡観察する。