アミラーゼ酵素の濃度をテストする方法
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必要なもの
- uv/vis分光光度計
- 15の大きなテストチューブ
- テストチューブラック
- 1 mg/ml澱粉ソリューション
- 偏向水
- ki/ヨウ素試薬
- ピペット
- dropper
- 組織
- cuvettes
- グラフペーパー
- 血液サンプル
- 遠心分離機
- 停止する
手順
-
澱粉標準曲線の準備
- 1
分光光度計をオンにし、620 nmの波長に設定します。実験中に応答が安定するように、機器を最低10分間ウォームアップさせてください。
- 2
6つのテストチューブを設定し、1〜6にラベルを付けて、試験管ラックに入れます。ベンチトップに澱粉、脱イオン水、キ/ヨウ素溶液の溶液を配置します。
- 3
ピペットを使用して、チューブ1を3 mLの脱イオン水で充填します。これは空白として機能します。チューブ2〜6を3.0 ml、2.9 ml、2.7 ml、2.4 ml、2.1 mlの脱イオン化水をそれぞれ充填します。次の順序で各チューブ2〜6にデンプン溶液を追加します。チューブ2は0 ml、チューブ3は0.1 mlを取得し、チューブ4は0.3 ml、チューブ5は0.6 mL、チューブ6は0.9 mLになります。
- 4
6つのチューブのそれぞれにKi/ヨウ素溶液を1滴加えます。分光光度計で吸光度を記録する前に、各チューブを徹底的に慎重に混ぜます。
- 5
キュベットを空白の溶液で満たし、キュベットの外側をきれいにし、分光光度計の空白の穴に入れます。吸光度をゼロに調整します。他のすべての溶液は、正の吸光度をもたらします。
- 6
サンプルキュベットに他の5つのソリューションのそれぞれを順番に埋めます。各測定の前にキュベットの外側を拭きます。各チューブの吸光度値を記録します。 テスト用に記入する前に、少なくとも1回新しいソリューションでキュベットをすすぎます。
- 7
澱粉濃度に対する吸光度の読み取り値をプロットするグラフを作成します。これは、特定の吸光度の読み取り値を持つ溶液の濃度を決定できる標準曲線です。
アミラーゼ濃度の決定
- 8
テストの最初の部分からすべてのテストチューブをきれいにします。後で使用するために空白のチューブを保持します。
- 9
患者から血液サンプルを取得します。サンプルを遠心分離機に入れ、赤血球を血漿から分離します。
- 10
試験管に9 mLの脱イオン水と1 mLの血漿を満たします。これは、プラズマの1:10希釈です。チューブを徹底的に混ぜ、1 mLの溶液を2番目の試験管にピペットします。 2つのチューブに内容をラベル付けします。
- 11
時限テストを実行する準備をします。停止時計を手元に置き、テストチューブラックにキュベットを備えた7つのテストチューブをセットアップします。テストが開始されると、2分ごとに読み取りが行われます。 7つのデータポイントのそれぞれの正確な時間と吸光度の読み取り値を記録します。 7つのテストチューブのそれぞれに2 mLの脱イオン水を満たします。
- 12
血漿の1 mlの希釈液を持つ試験管にデンプン溶液9 mlを加えます。デンプンソリューションの追加を開始したらすぐに、ストップウォッチを開始します。試験管をよく混ぜ、澱粉/プラズマ溶液を1 mlのピペットに1つのテストチューブのうちの最初に混ぜます。時間を記録します。 1滴のKi/ヨウ素溶液を試験管に加えて混合します。
- 13
キュベットに移し、外を拭き、吸収を記録します。残りの6つのテストチューブで2分間隔でプロセスを繰り返します。時限テストの終わりに、0、2、4、6、8、10、および12分の時間の間の実際の時間と吸収性の測定値が必要です。
- 14
標準曲線を使用して、7つのデータポイントのそれぞれの澱粉の濃度を見つけます。これらのポイントは時間とともに減少します。アミラーゼは澱粉を消化し、時間をかけて利用可能なすべての澱粉を消費します。
- 15
タイムされたテストのデータポイントを、澱粉濃度と時間としてグラフ化します。この曲線の勾配は、プラズマサンプルのアミラーゼの量を示します。
- 1