アミラーゼ酵素濃度の測定手順

アミラーゼは膵臓と唾液腺で産生され、炭水化物の消化に関与します。膵臓に疾患があると血中にアミラーゼが放出されます。消化管の症状や膵臓疾患が疑われる場合、医師は血液検査でアミラーゼ濃度を測定します。アミラーゼ濃度のモニタリングは、病状の進行や治療効果を評価する上で重要な情報を提供します。

必要なもの

分光光度計の電源を入れ、波長を 620 nm に設定し、最低 10 分間ウォームアップさせて測定値が安定するようにします。
試験管 6 本を用意し、1〜6 のラベルを付けてラックに並べます。デンプン溶液、脱イオン水、KI／ヨウ素試薬を作業台に準備します。
試験管 1 に脱イオン水 3 ml を入れてブランクとします。試験管 2〜6 にはそれぞれ 3.0、2.9、2.7、2.4、2.1 ml の脱イオン水を入れ、次の順にデンプン溶液を加えます：試験管 2＝0 ml、3＝0.1 ml、4＝0.3 ml、5＝0.6 ml、6＝0.9 ml。
各試験管に KI／ヨウ素試薬を 1 滴加え、よく混合します。
ブランク用キュベットに脱イオン水（ブランク）を入れ、外側を拭いて分光光度計のブランク穴にセットし、吸光度を 0 に調整します。
残りの 5 本の溶液を順にキュベットに入れ、測定前に外側を拭き、吸光度を記録します。測定間にキュベットは新しい溶液で必ず洗浄します。
吸光度とデンプン濃度の関係をグラフ化し、標準曲線を作成します。この曲線を用いて、未知試料の濃度を求められます。

標準曲線作成に使用した試験管をすべて洗浄し、ブランク管はそのまま残しておきます。
患者から血液サンプルを採取し、遠心分離機で赤血球と血漿を分離します。
脱イオン水 9 ml と血漿 1 ml を混合し、1:10 の希釈液を作ります。よく混ぜた後、1 ml を別の試験管に移し、ラベルを付けます。
ストップウォッチを用意し、試験管ラックに 7 本の試験管（各 2 ml 脱イオン水）を並べます。測定は 2 分ごとに行い、時間と吸光度を記録します。
1:10 希釈した血漿試料にデンプン溶液 9 ml を加え、同時にストップウォッチをスタートします。混合後、1 ml を最初の試験管に移し、KI／ヨウ素試薬を 1 滴加えて混ぜます。
キュベットに移し、外側を拭いて吸光度を測定します。この操作を残りの 6 本の試験管について、2 分間隔で繰り返し、0、2、4、6、8、10、12 分の 7 点のデータを取得します。
標準曲線を用いて各時間点のデンプン濃度を求めます。時間が経つにつれデンプン濃度は低下し、アミラーゼがデンプンを分解したことを示します。
デンプン濃度（y 軸）と時間（x 軸）をプロットし、得られた曲線の傾きから血漿中のアミラーゼ活性を算出します。