抗体標識手順

抗体標識手順は、特定の分子の存在を検出するために生物科学で使用される手法です。これらの手順は、抗原と抗体の関係を利用しています。抗原は、免疫系が認識するあらゆる分子にすることができます。抗体は、単一の抗原を特異的に認識するY字型タンパク質です。生物学者は、抗体と抗原の結合関係を使用して、サンプル内の特定の分子の位置を決定します。

1. elisa

   • ELISA、または酵素結合免疫吸着アッセイは、抗原または抗体の存在を検出するために使用される生物学的実験室技術です。医療診断では、患者が特定のタイプの感染症にさらされているかどうかを判断するためによく使用されます。

     ELISAを実行するために、関心のある抗原を含むサンプルとMDASH;は、皿のしっかりしたサポートに固定されています。補完的な抗体を含む溶液が皿に加えられ、抗体は抗原に結合します。次に、過剰な抗体を洗浄し、皿内の抗原抗体結合ペアのみを残します。これらは、抗体に結合して視覚信号を放出する蛍光分子を追加することで視覚化できます。このように、関心のある抗原の存在と量は間接的に決定できます。

   ウエスタンブロット

   • ウエスタンブロットは、サンプル内の特定のタンパク質を検出し、そのサイズを決定するために使用される別のタイプの技術です。まず、サンプルタンパク質は、ゲル電気泳動を使用してゲル上のサイズによって広げられます。この時点で、タンパク質は肉眼では見えません。科学者はその後、タンパク質を膜に移し、抗体を含む溶液を関心のある抗原に追加します。過剰溶液を洗い流した後、抗体は膜上の抗原に結合します。

     二次抗体を追加すると、元の、または一次抗体が光を放出します。放出された光の量を定量化することで、研究者は抗原の存在、他のタンパク質と比較してそのサイズを決定することができます。

   免疫組織化学

   • 免疫組織化学は、研究者が組織サンプルのタンパク質の位置を視覚化できるようにする手法です。サンプルの小さなスライスを調製し、目的の抗原に付着する一次抗体が追加されます。研究者が二次抗体を追加する前に、過剰な溶液を洗い流します。この抗体は、一次抗体抗原ペアに付着し、光を放出し、目的の抗原の位置を示します。

     科学者は顕微鏡を使用して、抗原が細胞内にある場所を視覚化します。特定のタンパク質に固有のそれぞれの複数の異なる抗体を使用して、細胞内のいくつかの分子の相対的な位置を決定できます。これが目標である場合、異なる色の二次抗体を使用して、目的の異なる分子を区別します。

   フローサイトメトリー

   • 蛍光活性化細胞ソーティング＆mdash;またはfacs＆mdash;は、溶液中の異なるタイプの細胞を分離するために使用されるフローサイトメトリーの一種です。それぞれの異なるタイプの細胞は、その細胞タイプに特異的な抗体で「タグ付け」されます。これらの抗体のそれぞれは、異なる色の光を放出します。マシンはソリューションを攪拌して個々の液滴に分割し、センサーを使用して各液滴の色を検出します。機械は、発光した色でセルを並べ替え、それらに含まれるタンパク質の種類に基づいてそれらを分割します。 FACS方法論により、研究者は関心のある細胞を研究質問に並べ替えて定量化できます。

   免疫電子顕微鏡

   • 正常な電子顕微鏡により、科学者は最大100万回拡大した細胞の構造を調べることができます。免疫電子顕微鏡は、抗体抗原結合の特性を使用して、非常に薄い組織切片の特定のタンパク質を視覚化します。第一に、付着した金粒子を含む抗体は、目的の抗原に結合することが許可されています。次に、電子顕微鏡が金粒子を視覚化し、研究者にタンパク質が細胞内の局在化されている場所のイメージを与えます。

     免疫電子顕微鏡は理論的には簡単ですが、多くの生物学的研究プログラムでの使用の人気を制限することは技術的に困難で非常に高価です。