フローサイトメトリーの細胞内染色プロトコル

フローサイトメトリーは、細胞タンパク質の研究に役立つツールです。細胞内のタンパク質からの光または蛍光の発光を利用します。蛍光でタグ付けされた抗体またはプローブは、特定のタンパク質の研究に使用されます。フローサイトメトリーは、癌を含む多くの疾患の診断に使用されますが、医学研究にも役立ちます。

1. セルの固定

   • 細胞内タンパク質の安定性を維持するために、細胞を固定する必要があります。ホルムアルデヒドやアイスコールドアセトンなど、多くの固定剤を使用できます。固定に続いて、抗体が細胞に入るように細胞膜を浸透させる必要があります。 TritonやNP-40などの洗剤を使用して、細胞膜に穴を開けるために使用できます。

   染色

   • ブロッキングバッファーの細胞洗浄細胞は、リン酸緩衝生理食塩水BSA/PBSで希釈した0.5％ウシ血清アルブミン。細胞は、非特異的結合を減らすためにブロッキングバッファーでインキュベートされます。ブロッキングバッファーで希釈した一次抗体を加え、最適化された時間のために、室温でインキュベートするために放置します。ブロッキングバッファーで洗浄。

   分析

   • 蛍光タグで標識された二次抗体を室温で30分間インキュベートします。ブロッキングバッファー中の非結合抗体洗浄細胞を除去する。セルをペレットにスピンしてから、PBSで再懸濁し、フローサイトメーターで分析します。