MBP（マルトース結合タンパク質）精製プロトコル

MBP融合タンパク質の精製

• 本プロトコルでは、20 mLのアミロース樹脂をpH7.4のTris緩衝液、NaCl、β-メルカプトエタノール（ME）、EDTAで洗浄し、細胞抽出液を添加して遠心し、ゲル電気泳動で解析します。その後、クロマトグラフ装置でカラムを通過させ、溶出液中のタンパク質を観察します。

小規模MBP融合タンパク質の精製

• ヘブライ大学の手順に従い、IPTGで誘導した培養液を8,000 rpm、20 °Cで10分遠心し、上清を除去して冷却PBSバッファーと混合します。サンプルを複数チューブに分割し再度遠心し、‑80 °Cで保存して後続解析に備えます。

マルトース結合タンパク質タグ（His‑MBP）の精製

• アフィニティタグは遺伝子工学的に付加された分子で、タンパク質の検出と精製に用いられます。本プロトコルは3段階に分かれ、(1) ヒスチジンタグ付きMBP（His‑MBP）の構築、(2) 溶解性評価のパイロット実験、(3) 大規模精製を行います。E. coli培養にはアンピシリン、カナマイシン、IPTG、無水テトラサイクリン、グルコース、細胞破砕バッファー、DNAポリメラーゼ、PCRプライマー、Tris‑Acetate‑EDTA、エチジウムブロモイドなどを使用します。