細胞凍結プロトコル

凍結を通して細胞を保存することは、細胞を長期間保存できるため、研究、獣医学、動物の繁殖に不可欠です。ただし、選択された凍結方法は、セルの損傷を減らしたり防止したりする必要があります。凍結保存エージェントと方法は、細胞型に依存できます。

1. 準備

   • 細胞は健康であるときに凍結し、90％の生存率で積極的に成長する必要があります。生存率を維持し、細胞の損傷を防ぐために、ハンドリングと高速遠心分離と激しいピペッティングまたは吸引に注意する必要があります。

   凍結保護

   • 凍結保護剤は、細胞内水の代替品として使用されます。薬剤は、細胞内で発生する氷の結晶と脱水を防ぎます。滅菌したグリセロールと滅菌ジメチルスルホキシドは、細胞型に応じて、胎児の子牛血清または成長媒体のいずれかで希釈された5パーセントから15パーセント（体積あたりの体積）の濃度でよく使用されます。

   凍結と保管

   • 凍結混合物の細胞はゆっくりと冷却する必要があります。プログラム可能な冷凍庫が利用できない場合、クリオビアルを組織に包むか、発泡スチロールに入れて、凍結プロセスが遅くなる可能性があります。細胞は摂氏80度マイナス24時間保管し、その後、長期貯蔵のために液体窒素に移します。

   解凍

   • 凍結した細胞はすぐに解凍する必要があります。摂氏37度の水浴を使用できます。ただし、液体窒素がバイアルに入り、解凍時に爆発する可能性があるため、液体窒素に保存された細胞には注意が必要です。凍結混合物は、成長媒体で希釈する必要があります。細胞生存率は、染料トリパンブルーと通常のように培養された細胞で評価する必要があります。