Hoechst染色のプロトコル

Hoechst染色は、蛍光顕微鏡とフローサイトメトリー技術を介したDNAとRNAの標識に使用される蛍光色素です。 Hoechst 33258およびHoechst 33342は、これらの染色の中で最も使用されています。それらはDNA分子に結合する能力を持ち、核とミトコンドリアが紫外線の下で蛍光を見せます。 Hoechst染色のプロトコルは、バイオテクノロジーおよび遺伝学の研究所で一般的な慣行であり、Hoechst 33258とHoechst 33342の両方を使用した細胞染色技術を含みます。

1. Hoechst 33342 HSC染色および幹細胞精製プロトコル

   • このプロトコルは、マウスの骨髄から細胞を染色するために使用されます。技術者は、HBSS+塩溶液、HEPESバッファー、胎児の子牛血清で骨髄サンプルを準備します。それらは溶液を回転させ、既存のDMEM培地に追加します。 その後、Hoechst染色が追加されます。この溶液は、ピッツバーグ大学の免疫学部を報告していると報告しています。 DNAセグメントは、サイトメーターの下で蛍光が発生します。

   Hoechst 33342 DNA染色

   • このプロトコル中、技術者は蒸留水にHoechst 33342染色を懸濁し、2％の胎児の子牛血清を細胞サンプルに加え、緩衝液の助けを借りてpHを7.2に保ちました。 次に、細胞を98.6度fで1時間インキュベートし、すぐにサイトメーターと呼ばれる機器で分析しました。

     ミシガン大学の健康システムによると、染色されたDNAが目に見えるようになり、蛍光が発生します。

   DNA結合フルオロクロームHoechst 33258 を使用したDNA検出

   • このプロトコルは、DNAおよびRNAセグメントを分析するために、分光光度計と呼ばれる機器を使用しました。技術者は、Hoechst 33258作業ソリューションと子牛胸腺DNAサンプルを使用しています。また、DNAサンプルと臭化エチジウムと呼ばれる化学物質を使用して、分離溶液を作ります。その後、サイトメトリーの現在のプロトコルに従って、分光光度計を使用して、両方の培地で細胞染色の結果を比較します。