TPA精製プロトコル

組織プラスミノーゲン活性化因子またはTPAは、血栓を破壊できるタンパク質であるセリンプロテアーゼの一種です。 TPAは、血管を内部的に覆う細胞に含まれています。 TPAプロトコルは、肺塞栓症や心筋梗塞などの心臓および肺疾患だけでなく、脳卒中に関する医薬品および医学的研究の一部です。 TPA精製とは、クロマトグラフィーや電気泳動を含む一連のプロセスを通じて、他の分子からのこのタンパク質の分離を指します。

1. 豚の腎臓からのTPAの精製

   • このプロトコルは、腫瘍の形成に関連するフィブリンと呼ばれる凝固の産物を破壊するプロセスであるフィブリノリシスの研究で使用されています。技術者は、pH 4.2でアセトン乾燥豚腎臓からTPAを抽出します。次に、細胞沈殿を誘発するために硫酸アンモニウムを加えます。彼らはサンプルにN-ブチルセファロースを加え、それがクロマトグラファーで分析されます。 Concanavalin Aも添加され、異なるタンパク質を分離するためのクロマトグラフも添加しています。

   中国のハムスター卵巣および大腸菌細胞からのTPAの精製

   • タンパク質純度は、生物学的実験の成功における重要な要因です。精製されたTPAも市販されているため、精製溶液が不十分なため、時間を節約し、実験を危険にさらすリスクを回避します。このプロトコルには、哺乳類および細菌細胞におけるTPAの精製プロセスが含まれます。技術者は細胞サンプルを沈殿させ、それらをろ過し、親和性とゲルクロマトグラフィー分析を実施します。後で、彼らは商業生産の前に、結果を分析して比較します。

   大腸菌における活性ヒトTPAの発現

   • 透明な細胞溶解物は、リジン - セファロース柱に加えられ、クロマトグラファーで分析され、塩素ナトリウムの溶液で洗浄されます。別のサンプルは、非常に高い親和性でTPAに結合するタンパク質を含む2番目のクロマトグラフィカラムにロードされます。 2番目の列のサンプルは、亜鉛セファロースの溶液と混合されます。ジャーナル「応用および環境微生物学」によると、結果のタンパク質は90％以上の純度を示しています。