PBMCプロトコル

凍結保存された末梢血単核細胞（PBMC）は、免疫療法やワクチンへの反応を含む研究のための頻繁な標本の源です。一部のプロトコルはプロセスの分離と凍結段階に限定されていますが、他のプロトコルには解凍手順が含まれます。

1. 分離手順と凍結手順

   • 分離を促進するための市販の化合物を50 mlの遠心性チューブごとに配置し、チューブを30秒間遠心分離します。血液チューブのキャップに開口する前にアルコールを噴霧し、次に抗凝固剤で処理した全血を介してピペットを介して遠心管に移します。血液のプラズマ層はピペットで吸引されます。

   凍結

   • その後、前のステップからの細胞は、緩衝生理食塩水で3回遠心分離されます。細胞数の後、標本は遠心分離され、凍結培地に懸濁されます。凍結培地の標本は、次に1 mLの量の凍結液の間で分割されます。バイアルは

     に一晩保管されています

     -70ºCフリーザーと翌日、液体窒素の長期貯蔵に移動しました。

   安全な解凍

   • クリオビアルは液体窒素から37ºCの水浴に移され、標本は1〜2分解凍できます。各バイアルに温かい輸送メディアが追加されます。希釈細胞懸濁液を7分間遠心分離します。数と細胞の生存率がチェックされます。細胞が濃縮する必要がある場合、標本はさらに7分遠心分離されます。サンプルは作業溶液に希釈され、指定されたプロトコルで検査を開始する前に12〜18時間休んでいます。