末梢血単核細胞（PBMC）プロトコル
本稿では、免疫療法やワクチン応答の研究に頻繁に使用される凍結保存された末梢血単核細胞（PBMC）の取り扱い手順を紹介します。
分離手順と凍結手順
商用の分離促進試薬を各50 mL遠心チューブに加え、30秒遠心します。血液採取チューブのキャップはアルコールで消毒し、開封後、抗凝固剤処理された全血をピペットで遠心チューブに移します。その後、血漿層をピペットで吸引します。
凍結
上記の細胞を緩衝生理食塩水で3回遠心洗浄します。細胞数を測定した後、凍結培地に懸濁し、1 mLずつクライオバイアルに分注します。バイアルは一晩−70℃の冷凍庫で保存し、翌日液体窒素タンクに移して長期保存します。
安全な解凍
クライオバイアルを液体窒素から取り出し、37℃の水浴に入れて1〜2分間解凍します。温かい輸送培地を各バイアルに加え、細胞懸濁液を7分遠心します。細胞数と生存率を確認し、濃縮が必要な場合はさらに7分遠心します。その後、作業用濃度に調整し、12〜18時間培養してから所定の実験に使用します。