NADPH-オキシダーゼを測定する方法

酵素NADPHオキシダーゼは、血管平滑筋細胞の成長を含むプロセス中に、活性酸素種の生産者として同定されています。これらの反応性種は、高血圧、糖尿病、癌、炎症を含むさまざまな疾患に関連しています。この酵素の活性を監視する方法は、可能な治療開発に重要です。

1. NADPHオキシダーゼ

   • NADPHオキシダーゼは、NADPHと酸素の間の電子移動を支援する酵素のファミリーに属します。ただし、NADPHオキシダーゼは、反応性酸素種が他の手段を介して生成される他のファミリーメンバーと比較して、この反応から活性酸素種を生成するユニークな能力を持っています。マルチメリックタンパク質複合体NADPHオキシダーゼは、測定マーカーとして使用される膜結合フラボサイトクロムB558で構成されています。

   反応性酸素種（ROS）生成

   • ROS、特に過酸化水素の主な源として、NADPHオキシダーゼは、シグナル伝達プロセスに関与する血管で発現するアイソフォームを介して小さいが一貫した量を生成します。この一貫した生産は、最終的に天然の抗酸化システムを圧倒し、一酸化窒素などの保護化合物の損失を引き起こし、さらに強力なROSの生成を引き起こす可能性があります。

   化学発光法

   • 化学発光により、さまざまな濃度にわたるNADPHオキシダーゼ活性の非常に敏感で自動化された測定が可能になります。この方法中、NADPH基質をNADPHオキシダーゼを含む組織サンプルに加えます。反応すると、ROSが生成され、化合物ルシゲニンと反応して、測定される化学発光効果を生成します。発光は、酵素が反応の速度を決定するため、NADPHオキシダーゼ活性に直接比例します。

   フローサイトメトリーを介した速度論的アッセイ

   • この方法では、組織サンプルはフローサイトメトリーを介して分析されます。骨髄は、ハンクスのバランスの取れた塩溶液を使用してサンプルから分離されています。特定の汚れと検出抗体がポリスチレンチューブのサンプルに添加されます。次に、サンプルをインキュベートし、Hanksのバランス塩溶液で洗浄し、分子プローブで標識され、フローサイトメトリーから調製されます。コントロールチューブは、比較のために、フローサイトメーターを調整するために作成されています。その後、マシンが実行され、測定値が記録されます。