NADPHオキシダーゼ活性測定法

NADPHオキシダーゼは血管平滑筋細胞の増殖などの過程で活性酸素種（ROS）を産生する酵素として知られています。これらのROSは高血圧、糖尿病、がん、炎症など多様な疾患と関係しており、酵素活性の測定は治療法開発に不可欠です。

NADPHオキシダーゼとは

NADPHオキシダーゼはNADPHと酸素間の電子移動を触媒し、特にROSを生成する能力を持つ酵素群です。膜結合型フラボシトクロームb558を中心とした多量体構造を取り、b558は測定マーカーとしても利用されます。

活性酸素種（ROS）の生成

血管に発現するNADPHオキシダーゼは主に過酸化水素をはじめとしたROSを少量ながら継続的に産生し、シグナル伝達に関与します。長期にわたる過剰産生は抗酸化系を圧倒し、一酸化窒素など保護分子を失わせ、さらに強力なROSの生成へとつながります。

化学発光法による測定

化学発光法はNADPHオキシダーゼ活性を高感度かつ自動的に定量できる手法です。組織サンプルにNADPH基質を加えると酵素反応でROSが生成し、ルシゲニンと反応して光を放出します。この発光強度は酵素活性に比例し、濃度範囲全体で測定可能です。

フローサイトメトリーによる動的アッセイ

フローサイトメトリーを用いた動的アッセイでは、組織から骨髄細胞をハンクス平衡塩溶液で分離し、ポリスチレンチューブに入れて特異的な染色剤や検出抗体を添加します。インキュベーション後に洗浄し、分子プローブで標識したサンプルをフローサイトメーターで解析します。対照チューブを併用して校正し、得られたデータから酵素活性を定量します。