直接および間接的なELISAの違い

酵素結合免疫吸着アッセイ（ELISA）は、抗体酵素複合体と抗原または抗体を固体表面に固定した反応を伴います。共役酵素と適切な基質とのインキュベーションにより、産物が形成されます。製品の形成は、抗原または抗体の存在を検出するのに役立ち、その量は発生した抗原抗体反応の量の尺度を提供します。 ELISAテストは、直接および間接の2つの形式で実行できます。

1. テスト形式

   • 直接ELISAテストでは、マイクロタイタープレートの壁に一次抗体が保持されます。抗原を封じ込めると疑われるサンプルが添加されると、抗原抗体反応があります。次に、抗原と反応できる酵素結合二次抗体が添加されます。サンプルに抗原が存在する場合、この酵素結合抗体に結合します。無色基板が追加されると、色が発生すると、抗原の存在を示します。間接的なELISAでは、マイクロタイタープレートの壁に抗原が保持されます。抗体を含むと疑われるサンプルが添加されると、抗原抗体反応が発生します。次に、抗体の非結合領域と反応できる酵素結合二次抗体が添加されます。無色基板が追加されると、使用されたサンプルに抗体が含まれている場合、色の発達につながります。

   テストの容易さ

   • 幅広い標識二次抗体が市販されています。 その上、特定の種にいくつかの一次抗体を生成し、同じ二次抗体を検出に使用することが可能です。これにより、間接的なELISAの実行が簡単になります。直接ELISAでは、一次抗体は、サンプルに存在すると疑われる特定の抗原と反応するために特異的に準備する必要があります。これにより、直接的なELISAが間接テストと比較して不利になります。

   テストの速さ

   • 直接ELISAテストは、単一の抗体のみを使用するため、間接テストと比較して迅速です。間接ELISAは、テスト手順中に2番目の抗体とのインキュベーションの追加ステップを必要とします。これにより、結果の取得が遅れます。

   感度

   • 直接ELISAテストは、信号増幅量がはるかに少ないため、テストの間接形式よりも感度が低くなります。その上、酵素による一次抗体の標識は、その免疫反応性プロファイルを損なう可能性があります。間接ELISAの場合、一次抗体は標識されていないため、免疫反応性を保持します。その上、各一次抗体には、二次抗体で結合できる多くのエピトープがあります。これにより、信号の増幅が可能になり、メソッドの感度が向上します。ただし、抗原と二次抗体の間に交差反応性が発生する可能性があり、結果に誤りが生じます。直接ELISAメソッドにはそのような可能性はありません。