直接ELISAと間接ELISAの違い

酵素結合免疫測定法（ELISA）は、抗体と酵素が結合した試薬が、固体表面に固定された抗原または抗体と反応することで、酵素基質により可視的な産物を生成し、対象の存在と量を測定する手法です。ELISAは主に「直接法」と「間接法」の2種類があります。

テストの形式

【直接ELISA】マイクロプレートのウェル壁に一次抗体（抗原特異的）を固定し、検体中の抗原を加えて抗原抗体反応を起こさせます。その後、酵素標識された二次抗体（一次抗体と結合可能）を加え、基質を反応させて色が出れば抗原の存在が確認できます。

【間接ELISA】ウェル壁に抗原を固定し、検体中の一次抗体（抗原に対する抗体）を加えて結合させます。続いて、酵素標識された二次抗体（一次抗体のFc部位に結合）を加え、基質反応で色が出れば一次抗体の存在が確認できます。

検査の容易さ

間接ELISAは、市販の酵素標識二次抗体が豊富に揃っており、同一種の一次抗体でも同じ二次抗体で検出できるため、手順が簡便です。一方、直接ELISAでは一次抗体を酵素で標識する必要があるため、特定の抗原に合わせて一次抗体を個別に調製しなければならず、手間が増えます。

検査速度

直接ELISAは一次抗体のみで検出できるため、インキュベーションステップが少なく、結果が速く得られます。間接ELISAは二次抗体のインキュベーションが追加されるため、やや時間がかかります。

感度

間接ELISAは一次抗体が未標識で免疫活性が保たれ、さらに一次抗体が持つ複数のエピトープに二次抗体が結合できるため、シグナル増幅が起こり感度が高くなります。ただし、二次抗体が非特異的に結合するリスクもあります。直接ELISAは一次抗体が酵素で標識されるためシグナル増幅は限定的で感度は低めですが、二次抗体による交差反応の心配はありません。