ドットブロット(スロットブロット)プロトコル
ドットブロット(スロットブロット)は、分子生物学者がバイオ分子を検出するために使用する手法です。検出したいバイオ分子を含む混合液を膜上に点として直接適用し、核酸プローブや抗体で検出します。この方法は、特定のバイオ分子の有無を確認できますが、サイズ情報は得られないため、サイズ測定が必要な場合は他の手法と併用します。
サザンブロット
サザンブロットは、特定のDNA配列を検出するプロトコルです。化学的に分離したDNA断片をフィルターメンブレンに転写し、プローブハイブリダイゼーションにより目的配列を検出します。これにより、ゲノム中の配列数(遺伝子コピー数)を定量できます。1975年に英国のエドウィン・サザンが開発しました。
ノーザンブロット
ノーザンブロットは、サンプル中のRNAを検出して遺伝子発現を解析する手法です。細胞の発達段階や疾患状態における特定遺伝子の発現を観察できます。RNAをサイズ別に分離し、対象配列の一部を検出します。1977年にスタンフォード大学の研究チームが開発しました。
ウェスタンブロット
ウェスタンブロット(タンパク質免疫ブロット)は、組織サンプル中の特定タンパク質を検出します。ゲル電気泳動でタンパク質をサイズまたは構造別に分離し、膜に転写した後、対象タンパク質に対する一次抗体と二次抗体で検出します。HIV、狂牛病、ライム病、B型肝炎、猫エイズなどの診断に利用されています。
サウスウェスタンブロット
サウスウェスタンブロットは、DNA結合タンパク質を特異的なプローブに結合させる能力で同定・特性評価する手法です。ゲル電気泳動で分離したタンパク質を膜に転写し、サザンブロットとウェスタンブロットの手順を組み合わせます。
